24小时热门版块排行榜    

查看: 985  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zlyshandon

木虫 (正式写手)

[求助] 双向电泳总是有条纹。

如图,总是有条纹在,丙酮(-20沉淀两小时),TCA(15%)沉淀都会有这个问题,一向在升压过程 中没有什么问题,电流也不会太大。是霉菌的胞内蛋白,沉淀后的蛋白浓度大概是2.5mg/ml的样子。
1、24cm的胶条多少的上样量合适?我上的是600微克。
2、样品处理为先1:1的湿菌体和玻璃珠混合后液氮研磨,再用minibeads beater间歇破碎10min(30s破碎30s冰浴)。离心后取上清沉淀。染色是胶体考染。第一次做的时候染色完成后蛋白点比较清晰,但是用超纯水脱色后就变成了条带状,不知道是为什么?有人遇到过这种情况吗?
做了好久了都是有条纹,希望哪位大侠给指导下,可以追加金币的,只要能把问题解决了。谢谢!

1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zlyshandon: 金币+5, 谢谢 2013-05-21 15:46:00
感觉你的胶图上的点聚焦不是特别好啊,上样量可以用800或1000μg,如果你的是pH3-10线性的,可以换成pH4-7线性的看看,因为你的点集中在比较中间,可以用窄范围的看看。聚焦时间可以延长一下,那个条带我也经常出现,也不知道什么原因,我出现的一般在碱性端
5楼2013-05-21 09:13:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zlyshandon

木虫 (正式写手)

3、蛋白好像都是比较小的蛋白,大分子量蛋白比较少,这是怎么回事呢?
2楼2012-09-10 10:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudongzhai

金虫 (正式写手)

钻石虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得应该不是染色脱色的问题,因为我用双向电泳后的胶去做过WB,WB后的膜上也会有那样的条纹
我思故我在
3楼2012-09-10 12:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanziliuli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-11 15:59:13
首先你24cm的胶条PH是多少,你上样量有点少了,感觉蛋白点不是很多,ph3-10上样1000ug左右,PH4-7上样1500ug左右。蛋白都集中在小分子区域,像是蛋白发生降解了,胶的背景也比较深,杂志没去除干净。条纹可能是核酸等杂质引起的
做好科研
4楼2012-09-11 14:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见