| 查看: 1469 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
western blot 遇到困难 请求帮助！！！
|
||
|
最近做western一直不顺 希望高手给予帮忙啊 我的目的蛋白是116KDa，51KDa 均是单抗， 内参是36KDa， 分离胶10% 浓缩胶是5% 蛋白电泳恒压50V 50min 90V 60min 三个蛋白一起转膜 恒压100V 2h 封闭2小时， 一抗、二抗均是1:500稀释， 一抗37℃摇床孵育1小时 4℃过夜， 二抗37℃摇床孵育1小时 显出的条带如图中： 116的蛋白在最上面 膜背景比较暗，而且出现杂带（但是我订购的abcam的说明书上是单抗的）； 51的那个蛋白条带比较暗，都看不太清楚条带； 最让人头疼的是内参（最下面的那个）竟然没条带  ； 这中间到底出现了什么原因呢？刚接触蛋白，做了几次，结果都不是很好，很是头疼，希望各位能给点指导意见，谢谢了！ IMG0890A.jpg  IMG0891A.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Western Blot出现问题
已经有19人回复
- western blot实验技术
已经有14人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- western blot方法大全
已经有237人回复
- 提供Western blot技术服务
已经有63人回复
- western blot 请教
已经有10人回复
- western blot的问题
已经有9人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 新手求助western blot
已经有22人回复
- 【求助/交流】westernblot
已经有10人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有35人回复
3楼2012-09-10 15:27:02
gaorongbest
新虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 147.7
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 18.3小时
- 虫号: 1726688
- 注册: 2012-03-30
- 性别: MM
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+4, 应助指数+1 2012-09-11 10:06:38
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+4, 应助指数+1 2012-09-11 10:06:38
| 哪几个是你的三个样？（除了Marker）；电泳的时候没问题，因为你的Marker都跑开了；转膜之前你有没有用丽春红染色看看蛋白条带？转膜的电压比较小，你的Marker都不是很清晰（还是你照相没照好），按常规来说，进口预染的Marker应该很清晰；转膜的时候是常温还是在低温条件下转的？有可能是温度原因；另外，你的电转液是新配的还是？（如果不是，可以用新的电转液试试）（相对来说，整个背景不深，说明你洗膜没问题），你试试我说的这些，看看有改变不 |
2楼2012-09-10 10:58:52
linyingjia
至尊木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 105 (高中生)
- 贵宾: 0.139
- 金币: 24730.4
- 散金: 1
- 红花: 22
- 帖子: 3968
- 在线: 234.5小时
- 虫号: 668860
- 注册: 2008-12-05
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
4楼2012-09-11 21:19:03
5楼2012-09-11 22:07:30
