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限制性内切酶，一直切不开……求助高手
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限制性内切酶Nt.BbVCI，切双链中CCTCAGC，但是遇到了切不开的问题。本来是想利用内切酶信号放大来着，但做出来的信号甚至还不如不加内切酶。 不知道我的操作还是哪儿出了问题： 120微升的反应体系，两个DNA杂交后24微升，内切酶3微升,10×NEB缓冲液 12微升，双蒸水稀释至120微升，然后在37℃下温育1-2h。（两个DNA本身的缓冲液是PH7.9 TE溶液，10mM Tris—Hcl+1mMEDTA+0.3M NaCl，不知道这个缓冲液会否和NEB产生冲突？） NEB的内切酶，据说不是那么容易失活（这个地方想问，网上说的‘冰上操作’是不是特别影响酶活性）； 还有，两个DNA现在证明是可以杂交的（“能杂交”能证明纯度足够吗？） 问题很多，求助高手解答。 （发现自己倾家荡产也就1个金币  大家别嫌弃）[ Last edited by yesterday_07 on 2012-8-30 at 18:08 ] |
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