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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于限制性内切酶的用量
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chz16160520

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于限制性内切酶的用量 已有4人参与

俺是新手，对于限制性内切酶的用量不知道应该怎么把握，希望高手路过能指教一下。。。。
因为酶比较贵啊，一管都没多少，几下就没了。。。。。
例如：7.5ug的DNA，你们习惯用多少的反应体系，用多少酶啊？？？（酶的浓度4-12U/ul）
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1楼 2011-02-28 19:08:23
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-02-28 19:48:41
NEB的酶比较好用，如果做SOuthern实验，每1ugDNA至少要3U的酶，如果是普通的质粒酶切，50ul酶切体系，加20-30ul质粒，加1-2ul吧。
酶切鉴定加0.3ul即可！
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2楼2011-02-28 19:17:58
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做过20微的体系用0,5微的酶就Ok，

50微的体系，都是用1微也没问题
赞一下(1人) 回复此楼
千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
3楼2011-02-28 21:36:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请按照酶活定义，计算酶量与时间
少酶就反应久一点~~可以切开的
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4楼2011-02-28 22:16:56
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DNA量可以稍微少加一些，50ul体系的话酶一般加1---2ul！不过实际上都是加1ul的！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-02-28 22:31:41
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