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chz16160520

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于限制性内切酶的用量 已有4人参与

俺是新手,对于限制性内切酶的用量不知道应该怎么把握,希望高手路过能指教一下。。。。
因为酶比较贵啊,一管都没多少,几下就没了。。。。。
例如:7.5ug的DNA,你们习惯用多少的反应体系,用多少酶啊???(酶的浓度4-12U/ul)
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-02-28 19:48:41
NEB的酶比较好用,如果做SOuthern实验,每1ugDNA至少要3U的酶,如果是普通的质粒酶切,50ul酶切体系,加20-30ul质粒,加1-2ul吧。
酶切鉴定加0.3ul即可!
2楼2011-02-28 19:17:58
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主


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做过20微的体系用0,5微的酶就Ok,

50微的体系,都是用1微也没问题
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
3楼2011-02-28 21:36:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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请按照酶活定义,计算酶量与时间
少酶就反应久一点~~可以切开的
4楼2011-02-28 22:16:56
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


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DNA量可以稍微少加一些,50ul体系的话酶一般加1---2ul!不过实际上都是加1ul的!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-02-28 22:31:41
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