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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-08-27 13:33:10
对于特异性,你的pcr结果已经不错了,个人不建议你为了增加特异性而再增加退火温度;pcr的循环数一般20--35个循环足矣,到后期你里面的dNTP也都没有了,都是无效循环。所以建议你减少循环数;同时也建议你减少退火时间到25s或30s。
对于产量,有几个建议:
增加PCR平行数,以量增加最后产量;  将你的pcr产物稀释100--200倍后作为模板再进行pcr;   利用touch down PCR,一定程度可以增加。
对于pcr,建议不要加太多酶,不出条带应该继续降低退火温度。一般pcr的退火温度比算出来的Tm值少5--10度。
以上仅为个人建议。
5楼2012-08-27 12:23:04
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