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RT-PCR模板问题。
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| 我是准备设计简并引物扩增一个鱼类的未知基因的保守区。一些文献上是提取脑部总RNA，然后反转录得到第一链CDNA,然后用这CDNA做模板扩增保守区。但是我老师的想法是直接提取DNA，然后用DNA做模板来扩增保守区。请问有经验的同学老师，这样可行否？各自的有缺点是什么？请不吝赐教。 |
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mgangle
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4楼2012-08-24 18:11:01
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| 在高等动植物中，DNA和RNA的区别在于，DNA是全基因序列含有内含子和外显子其扩增得到的序列不能有完整的ORF框架，RNA只含有外显子是一个完整的ORF框架。如果本实验的目的是先通过DNA扩增获得部分序列，然后通过DNA序列设计特异引物以cDNA为模板扩增目的基因是可行的，但是如果想直接从DNA序列里获得目的基因的mRNA序列这个肯定是不行的！因为你不可能直接从DNA序列中分析哪部分是外显子那部分是内含子。 |
2楼2012-08-24 16:32:06
3楼2012-08-24 17:03:52
