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RT-PCR模板问题。
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| 我是准备设计简并引物扩增一个鱼类的未知基因的保守区。一些文献上是提取脑部总RNA,然后反转录得到第一链CDNA,然后用这CDNA做模板扩增保守区。但是我老师的想法是直接提取DNA,然后用DNA做模板来扩增保守区。请问有经验的同学老师,这样可行否?各自的有缺点是什么?请不吝赐教。 |
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3楼2012-08-24 17:03:52
mgangle
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【答案】应助回帖
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fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-09-11 11:10:55
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| 在高等动植物中,DNA和RNA的区别在于,DNA是全基因序列含有内含子和外显子其扩增得到的序列不能有完整的ORF框架,RNA只含有外显子是一个完整的ORF框架。如果本实验的目的是先通过DNA扩增获得部分序列,然后通过DNA序列设计特异引物以cDNA为模板扩增目的基因是可行的,但是如果想直接从DNA序列里获得目的基因的mRNA序列这个肯定是不行的!因为你不可能直接从DNA序列中分析哪部分是外显子那部分是内含子。 |

2楼2012-08-24 16:32:06
mgangle
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4楼2012-08-24 18:11:01













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