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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆的高手请指点一二
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梦之奋斗

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆的高手请指点一二

请问各位做克隆的大侠：克隆基因的过程中拿3'端片段的时候用race还是反向PCR技术会好做一点啊，成功的几率要大点呢？
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1楼 2012-08-24 15:01:49
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-24 21:34:44
3·端的话用RACE做好些，也挺方便！cDNA合成时不要用OligdT，用M4T反转录，这样你只要设计3条不同位置的上游引物（分别命名为P1，P2，P3），以M4T为下游引物，第一次用P1和M4T cDNA为模板，第二次用P2和M4T 第一次PCR产物为模板，第三次用P3和M4T 第二次PCR产物为模板，OK，搞定！（M4T序列百度就能百出来，做病毒常用的引物）
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
2楼2012-08-24 15:26:22
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梦之奋斗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mgangle at 2012-08-24 15:26:22
3·端的话用RACE做好些，也挺方便！cDNA合成时不要用OligdT，用M4T反转录，这样你只要设计3条不同位置的上游引物（分别命名为P1，P2，P3），以M4T为下游引物，第一次用P1和M4T cDNA为模板，第二次用P2和M4T 第一次P ...

做的不是病毒呢，植物类！
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3楼2012-08-24 20:45:22
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦之奋斗 at 2012-08-24 20:45:22
做的不是病毒呢，植物类！...

原理都一样！我们也经常用M4T做植物基因的3 RACE！M4T是通过对各个mRNA的polyA尾部碱基序列统计得来的！所以基本适用植物基因。
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
4楼2012-08-24 20:49:14
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梦之奋斗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mgangle at 2012-08-24 20:49:14
原理都一样！我们也经常用M4T做植物基因的3 RACE！M4T是通过对各个mRNA的polyA尾部碱基序列统计得来的！所以基本适用植物基因。...

哦，那是的吧，那先是哈race来做！
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5楼2012-08-24 23:01:20
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