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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆
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lfangd1

新虫 (小有名气)

[求助] 克隆

初次做克隆，蓝白斑帅选时，全部都是白斑，可是菌液PCR检测时全都为阴性，哪位高手能指点一二啊？
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1楼 2012-05-10 21:54:56
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信息太少。请告知：你用的商业化的质粒名称；平板有多少colonies;这一步是不是T克隆？
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2楼2012-05-10 22:06:16
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lfangd1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-05-10 22:06:16:
信息太少。请告知：你用的商业化的质粒名称；平板有多少colonies;这一步是不是T克隆？

连接PMD18-T载体，转化后平板有过百个克隆子，全是白斑，菌液PCR阴性
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3楼2012-05-11 08:40:37
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-11 13:47:04
既然是T克隆，我的经验是多少都会有一些自连的质粒出现（主要原因是T载体处理的不好），所以几百个colonies中应该会有个位数的蓝斑。现在都是白斑，你先确定固体培养基没有问题，然后直接做菌落PCR，就是直接挑菌落做PCR看看。
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4楼2012-05-11 11:54:08
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