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新虫 (小有名气)

[求助] 克隆

初次做克隆，蓝白斑帅选时，全部都是白斑，可是菌液PCR检测时全都为阴性，哪位高手能指点一二啊？

1楼 2012-05-10 21:54:56

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木虫 (正式写手)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-11 13:47:04

既然是T克隆，我的经验是多少都会有一些自连的质粒出现（主要原因是T载体处理的不好），所以几百个colonies中应该会有个位数的蓝斑。现在都是白斑，你先确定固体培养基没有问题，然后直接做菌落PCR，就是直接挑菌落做PCR看看。

4楼2012-05-11 11:54:08

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木虫 (正式写手)

感谢参与，应助指数 +1

信息太少。请告知：你用的商业化的质粒名称；平板有多少colonies;这一步是不是T克隆？

2楼2012-05-10 22:06:16

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新虫 (小有名气)

引用回帖:

2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-05-10 22:06:16:
信息太少。请告知：你用的商业化的质粒名称；平板有多少colonies;这一步是不是T克隆？

连接PMD18-T载体，转化后平板有过百个克隆子，全是白斑，菌液PCR阴性

3楼2012-05-11 08:40:37

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