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lfangd1

新虫 (小有名气)

[求助] 克隆

初次做克隆,蓝白斑帅选时,全部都是白斑,可是菌液PCR检测时全都为阴性,哪位高手能指点一二啊?
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-11 13:47:04
既然是T克隆,我的经验是多少都会有一些自连的质粒出现(主要原因是T载体处理的不好),所以几百个colonies中应该会有个位数的蓝斑。现在都是白斑,你先确定固体培养基没有问题,然后直接做菌落PCR,就是直接挑菌落做PCR看看。
4楼2012-05-11 11:54:08
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
信息太少。请告知:你用的商业化的质粒名称;平板有多少colonies;这一步是不是T克隆?
2楼2012-05-10 22:06:16
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lfangd1

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-05-10 22:06:16:
信息太少。请告知:你用的商业化的质粒名称;平板有多少colonies;这一步是不是T克隆?

连接PMD18-T载体,转化后平板有过百个克隆子,全是白斑,菌液PCR阴性
3楼2012-05-11 08:40:37
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