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wanghx_2012银虫 (小有名气)
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[求助]
载体和酶切片段连接的问题
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| 各位朋友,我现在在做重组质粒,用的是PHT304,想要在接头区连接一个Cry3a的启动子,现在我在启动子的上下油分别加了Pst1和Xba1的酶切位点.我用双酶切了T载体和304之后割胶回收了对应大小的片段,然后T4连接过夜转化DH5a,挑抗性平板上长的单菌落做PCR时可以看到微弱的1000bp的条带但是提质粒提出来的DNA远大于重组质粒理论大小.酶切的时候也看不到目标条带.我怀疑是不是有这样的情况:我的启动子自我连接了,然后这个连接体被接到了切开的304上.或则各位朋友有没有什么好的建议.多谢!~ |
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sd3824289
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