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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！
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banlangeny

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！

在修饰了-COOH的磁珠上连接NH3修饰的DNA（29碱基），再将罗丹明修饰的DNA（14个碱基）杂交在上述DNA上。
    具体操作为：取100 ul 磁珠，用200 ul 的咪唑盐酸（ph=6.8）清洗三次，磁分离后，用咪唑盐酸还原为100ul体系，再加入400 ul EDC(0.1M，现配现用）超声1min后活化1h，磁分离后加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer。取10 ul 0.00001M 用NH3修饰的DNA加入10 ul 咪唑盐酸（ph=6.8）混合30min后加入到用TAE稀释的磁珠中，在摇床中震荡下，37度，反应12h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗三次，加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer，再加入10 ul 0.00001M 罗丹明修饰的DNA，在37度下杂交2 h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗7次，将最后四次清洗液混合在分光光度计上测荧光，磁珠用TAE稀释后去激光共聚焦上拍照。
   结果：1，在激光共聚焦上拍的照片显示，有的时候接的非常均匀，荧光可以在单个磁珠上显示，但多数的实验荧光是在磁珠聚集团的上面显示，单个磁珠不能显示荧光
           2，最后四次的混合液测荧光发现还是有信号，说明前三次清洗不干净
  问题：1，如何清洗磁珠，使磁珠对DNA的吸附降到最低。
           2，磁珠接DNA,如何使DNA能够尽量多的并且均匀的连接在磁珠上。
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1楼2012-08-20 15:10:29
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luzhuoxuan

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banlangeny: 金币+1 2012-08-21 08:57:36

罗淑芬

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yubeihong

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caizeyuan922

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lina_2011

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candice1004

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