应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！
131/2返回列表12下一页
查看: 4190  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者banlangeny将赠送您 49 个金币

banlangeny

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！

在修饰了-COOH的磁珠上连接NH3修饰的DNA（29碱基），再将罗丹明修饰的DNA（14个碱基）杂交在上述DNA上。
    具体操作为：取100 ul 磁珠，用200 ul 的咪唑盐酸（ph=6.8）清洗三次，磁分离后，用咪唑盐酸还原为100ul体系，再加入400 ul EDC(0.1M，现配现用）超声1min后活化1h，磁分离后加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer。取10 ul 0.00001M 用NH3修饰的DNA加入10 ul 咪唑盐酸（ph=6.8）混合30min后加入到用TAE稀释的磁珠中，在摇床中震荡下，37度，反应12h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗三次，加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer，再加入10 ul 0.00001M 罗丹明修饰的DNA，在37度下杂交2 h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗7次，将最后四次清洗液混合在分光光度计上测荧光，磁珠用TAE稀释后去激光共聚焦上拍照。
   结果：1，在激光共聚焦上拍的照片显示，有的时候接的非常均匀，荧光可以在单个磁珠上显示，但多数的实验荧光是在磁珠聚集团的上面显示，单个磁珠不能显示荧光
           2，最后四次的混合液测荧光发现还是有信号，说明前三次清洗不干净
  问题：1，如何清洗磁珠，使磁珠对DNA的吸附降到最低。
           2，磁珠接DNA,如何使DNA能够尽量多的并且均匀的连接在磁珠上。
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

羧基活化EDC|DCC,NHS

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

banlangeny

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-08-20 15:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

luzhuoxuan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
banlangeny: 金币+1 2012-08-21 08:57:36
1 要均匀的话，在摇床中震动是否合适，一般选择恒温振荡器，即便如此大概每半个小时，要到涡旋仪上强涡旋1分钟。再试试看时间，觉得正常情况下无需12个小时那么长，可以参考下英骏它们试剂盒的一些操作方式。
2 降低背景，可以用杂交温度稍微提高一点，或者杂交时间减少一些，也可以更换一下洗涤液的配方。
赞一下(1人) 回复此楼
每天都要进步一点点
3楼2012-08-20 21:15:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

罗淑芬

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用含0.05%的Tween-20的PBS缓冲溶液冲洗效果会比较好。。。
  至于连接的更均匀，连接期间好不好晃动，每一个小时晃动一下效果比较好，我用的就是磁珠。。。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-09-12 08:48:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
磁珠的分散性首先要好才行，试试purimag G-COOH磁珠
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2018-01-11 14:54:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
谢谢
回复此楼
2楼2012-08-20 15:51:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caizeyuan922
4楼2012-08-20 21:46:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by caizeyuan922 at 2012-08-20 21:46:02
5楼2012-08-21 08:58:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stavexiao

银虫 (小有名气)
请问你的磁珠是自己做的 还是买的？如果是买的请问从哪个公司买的？
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-21 10:15:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stavexiao at 2012-08-21 10:15:09
请问你的磁珠是自己做的 还是买的？如果是买的请问从哪个公司买的？

天津倍思乐
回复此楼
7楼2012-09-04 08:35:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lina_2011

金虫 (小有名气)
我最近在做这个实验，对您的帖子很感兴趣。请问你实验里面用到的咪唑盐酸是用什么配的呢？EDC是脱水剂，那这样的话还可以用水做溶液吗？谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-03 11:30:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

candice1004

新虫 (初入文坛)
您好，我最近也在做磁珠修饰，我想请问一下，咪唑缓冲液是怎么配制的？是将咪唑溶解在水中再用盐酸调pH吗？里面还要加其它的盐吗？谢谢您，期待您的回复
赞一下 回复此楼
10楼2013-11-08 20:11:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 banlangeny 的主题更新
131/2返回列表12下一页
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今年国自必中，不中回家种田 +10 wutzxt 2024-06-28 11/550 2024-06-30 08:45 by wutzxt
[考博] 25申博?找科研助理岗位 +3 鸿钧少爷 2024-06-28 4/200 2024-06-30 08:19 by 老白菜614
[博后之家] 75批博士后面上项目公布了 +4 ishow1989 2024-06-28 5/250 2024-06-30 00:58 by ishow1989
[考博] 对象没有，还非常想读博，难以抉择 +36 pvrw0224 2024-06-23 68/3400 2024-06-29 22:34 by pvrw0224
[硕博家园] 开题 +3 东北。 2024-06-29 5/250 2024-06-29 21:58 by zyqchem
[有机交流] 大佬们，打的核磁氢谱与chemdraw预测的有偏差 +8 来了个 2024-06-26 9/450 2024-06-29 17:58 by if今年的吧
[论文投稿] 关于论文第一通讯作者的问题？ +12 winsaint 2024-06-26 12/600 2024-06-29 14:15 by 杨18354098226
[基金申请] 感觉地区基金太难了，申请了多年不中 +24 123为wqw 2024-06-27 31/1550 2024-06-29 14:14 by Siuhong Yiu
[基金申请] 能看出是否上会了吗 +11 articlefan 2024-06-23 17/850 2024-06-29 13:28 by articlefan
[基金申请] 出结果了 +25 wuyue526 2024-06-28 31/1550 2024-06-29 00:16 by wjl_135
[药学] 大佬们来讨论下，为什么分子里加入了有毒性的官能团分子反而没毒了 +4 HF111001 2024-06-24 5/250 2024-06-28 22:45 by 渣男2019
[基金申请] 省基金太难了 +13 aasahr 2024-06-26 15/750 2024-06-28 16:57 by lqllinqiaoli
[基金申请] 第75批博后面上 “应该是这两周”基金管理处的电话终于通了 +8 makele123 2024-06-27 11/550 2024-06-28 16:32 by since—2010
[基金申请] 基金评审时，评审专家还回去看申请人代表作之外的文章吗？ +12 孤单12站 2024-06-26 18/900 2024-06-27 18:30 by 孤单12站
[论文投稿] 材料投稿速度快的二三区期刊有哪些！ +3 加油努力7 2024-06-24 4/200 2024-06-27 18:09 by keyaner23
[有机交流] 脱酯基合成步骤 5+4 小辉灰@anhui 2024-06-25 8/400 2024-06-27 11:17 by 火龙骑士
[基金申请] 博后面上今天下午会公布吗？有无消息？ +26 hajkdfdf 2024-06-24 45/2250 2024-06-27 09:19 by kyukitu
[有机交流] 有机物的酸酐如何准确表征 10+3 方酱 2024-06-24 7/350 2024-06-26 17:53 by 宁静远行
[基金申请] 青年基金E02口青基去年几个函评专家？ +6 他山攻玉之石 2024-06-25 9/450 2024-06-26 15:09 by 他山攻玉之石
[基金申请] 2024安徽省哲社立项名单公示 +3 robin_work 2024-06-24 6/300 2024-06-25 14:37 by Pickfoot
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭