| 查看: 5743 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
banlangeny银虫 (小有名气)
|
[求助]
求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！
|
||
|
在修饰了-COOH的磁珠上连接NH3修饰的DNA（29碱基），再将罗丹明修饰的DNA（14个碱基）杂交在上述DNA上。 具体操作为：取100 ul 磁珠，用200 ul 的咪唑盐酸（ph=6.8）清洗三次，磁分离后，用咪唑盐酸还原为100ul体系，再加入400 ul EDC(0.1M，现配现用）超声1min后活化1h，磁分离后加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer。取10 ul 0.00001M 用NH3修饰的DNA加入10 ul 咪唑盐酸（ph=6.8）混合30min后加入到用TAE稀释的磁珠中，在摇床中震荡下，37度，反应12h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗三次，加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer，再加入10 ul 0.00001M 罗丹明修饰的DNA，在37度下杂交2 h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗7次，将最后四次清洗液混合在分光光度计上测荧光，磁珠用TAE稀释后去激光共聚焦上拍照。 结果：1，在激光共聚焦上拍的照片显示，有的时候接的非常均匀，荧光可以在单个磁珠上显示，但多数的实验荧光是在磁珠聚集团的上面显示，单个磁珠不能显示荧光 2，最后四次的混合液测荧光发现还是有信号，说明前三次清洗不干净 问题：1，如何清洗磁珠，使磁珠对DNA的吸附降到最低。 2，磁珠接DNA,如何使DNA能够尽量多的并且均匀的连接在磁珠上。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 羧基活化EDC|DCC,NHS |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
banlangeny» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有8人回复
-
国际合作可查了，中了面上
已经有17人回复
-
怎么查啊
已经有3人回复
-
国合可查了
已经有3人回复
-
系统进不去
已经有4人回复
-
系统查不到
已经有3人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有3人回复
-
国合里面能看到了
已经有6人回复
-
今天务委会开完了，明天出结果吗
已经有23人回复
-
科研孤儿太难了
已经有20人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于氧化石墨烯与DNA吸附的问题
已经有12人回复
- 【求助】求吸附能，吸附热的问题
已经有6人回复
- 求助（DNA长期保存及利用问题）
已经有2人回复
- 【求助/交流】dna 的提取问题 附图
已经有13人回复
- 【求助】请教关于氮气吸附等温线的问题？
已经有13人回复
- 【求助】硅胶拌样 死吸附问题
已经有20人回复
- 【求助】关于Dmol3的吸附问题
已经有6人回复
- 【求助】光催化剂吸附问题
已经有10人回复
- 【求助】CO化学吸附法测定贵金属催化剂分散度的问题
已经有10人回复
- 【求助】磁珠定义
已经有6人回复
- 【求助】吸附能问题
已经有10人回复
luzhuoxuan 
捐助贵宾 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 98.6
- 散金: 235
- 红花: 1
- 帖子: 90
- 在线: 35.8小时
- 虫号: 1921454
- 注册: 2012-08-02
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
3楼2012-08-20 21:15:43
banlangeny
银虫 (小有名气)
 |
5楼2012-08-21 08:58:17
6楼2012-08-21 10:15:09
banlangeny
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 206.8
- 帖子: 134
- 在线: 11.3小时
- 虫号: 1272647
- 注册: 2011-04-21
- 专业: 生化分析及生物传感
7楼2012-09-04 08:35:10
28