应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！
51/1返回列表
查看: 5751  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 磁珠接DNA以及其吸附问题！！！！！！！！！

在修饰了-COOH的磁珠上连接NH3修饰的DNA（29碱基），再将罗丹明修饰的DNA（14个碱基）杂交在上述DNA上。
    具体操作为：取100 ul 磁珠，用200 ul 的咪唑盐酸（ph=6.8）清洗三次，磁分离后，用咪唑盐酸还原为100ul体系，再加入400 ul EDC(0.1M，现配现用）超声1min后活化1h，磁分离后加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer。取10 ul 0.00001M 用NH3修饰的DNA加入10 ul 咪唑盐酸（ph=6.8）混合30min后加入到用TAE稀释的磁珠中，在摇床中震荡下，37度，反应12h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗三次，加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer，再加入10 ul 0.00001M 罗丹明修饰的DNA，在37度下杂交2 h。磁分离，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗7次，将最后四次清洗液混合在分光光度计上测荧光，磁珠用TAE稀释后去激光共聚焦上拍照。
   结果：1，在激光共聚焦上拍的照片显示，有的时候接的非常均匀，荧光可以在单个磁珠上显示，但多数的实验荧光是在磁珠聚集团的上面显示，单个磁珠不能显示荧光
           2，最后四次的混合液测荧光发现还是有信号，说明前三次清洗不干净
  问题：1，如何清洗磁珠，使磁珠对DNA的吸附降到最低。
           2，磁珠接DNA,如何使DNA能够尽量多的并且均匀的连接在磁珠上。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

羧基活化EDC|DCC,NHS

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

banlangeny

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-20 15:10:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by caizeyuan922 at 2012-08-20 21:46:02
5楼2012-08-21 08:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

luzhuoxuan

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
banlangeny: 金币+1 2012-08-21 08:57:36
1 要均匀的话，在摇床中震动是否合适，一般选择恒温振荡器，即便如此大概每半个小时，要到涡旋仪上强涡旋1分钟。再试试看时间，觉得正常情况下无需12个小时那么长，可以参考下英骏它们试剂盒的一些操作方式。
2 降低背景，可以用杂交温度稍微提高一点，或者杂交时间减少一些，也可以更换一下洗涤液的配方。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-08-20 21:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stavexiao

银虫 (小有名气)
请问你的磁珠是自己做的 还是买的？如果是买的请问从哪个公司买的？
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-21 10:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banlangeny

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stavexiao at 2012-08-21 10:15:09
请问你的磁珠是自己做的 还是买的？如果是买的请问从哪个公司买的？

天津倍思乐
回复此楼
7楼2012-09-04 08:35:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 05:13 by winsaint
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +9 Kittylucky 2026-08-27 9/450 2026-08-28 01:08 by jurkat.1640
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 3/150 2026-08-28 00:49 by 3RAFyYXYSwGS
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 4/200 2026-08-27 22:26 by 3RAFyYXYSwGS
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭