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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母表达无目的蛋白
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skuy1223

金虫 (小有名气)

[交流] 酵母表达无目的蛋白

我最近做了一次酵母表达，但是做SDS-PAGE显示没有目的条带。但是电转之后的平板上长了很多菌落。并且挑单克隆之后，做菌液PCR也有目的基因的条带（但是也有杂带）。从条带上看，好像是蛋白降解比较严重。但是除了这个问题，不知道各位大神还能帮我分析下是什么原因吗？
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1楼 2012-08-17 10:50:48
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skuy1223

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-08-18 18:14:36
我觉得该先将PCR 鉴定了阳性菌落，送去测序，看阅读框是不是正确，我多次遇到这样的情况，不表达。都是阅读框错误～

我在电转之前，已经将表达载体转入大肠杆菌并测过序了。测序结果也显示正确。难道转入酵母之后还要测序吗？
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16楼2012-08-18 19:44:37
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skuy1223

金虫 (小有名气)
希望大家多多帮助啊！！
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2楼2012-08-17 10:51:22
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wt3532

木虫 (著名写手)
★
skuy1223(金币+1): 谢谢参与
移码突变或者阅读框顺序不对
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3楼2012-08-17 12:12:44
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
skuy1223(金币+1): 谢谢参与
是不是分泌到胞外了啊？
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4楼2012-08-17 12:47:06
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