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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母表达问题
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] 酵母表达问题

各位虫友们好!我想请问大家一个问题，我最近在做酵母表达，通过表型筛选和抗生素浓度筛选后挑菌落进行提酵母基因组DNA，然后PCR鉴定为阳性，然后我就做表达，结果取了诱导五天的不同时间的样品后跑电泳结果哪个时间点的样品都没结果，我是用的上清跑的电泳！不知道是怎么回事，敬请指导！谢谢！
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1楼 2012-08-15 22:00:29
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 代号47 at 2012-08-16 10:55:12
我认为，酵母中异源表达基因存在一个很大的问题就是，真核生物密码子的问题，而且密码子存在偏好性，如果你仅仅是将基因导入，但不能确定其是否表达蛋白，我觉得欠妥，表达不出来也是常事。

我是根据毕赤酵母偏爱密码子设计的基因序列啊，选的都是偏爱的!
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4楼2012-08-19 21:44:46
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
XUMIN6891: 金币+1 2012-08-19 21:43:23
为什么只用上清跑电泳？你能确定你的目的蛋白只存在上清吗？建议用菌体总蛋白跑一次，确定蛋白能够表达，然后再将上清和沉淀分开电泳，确定在哪一部分。
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2楼2012-08-16 10:17:23
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代号47

新虫 (初入文坛)
我认为，酵母中异源表达基因存在一个很大的问题就是，真核生物密码子的问题，而且密码子存在偏好性，如果你仅仅是将基因导入，但不能确定其是否表达蛋白，我觉得欠妥，表达不出来也是常事。
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3楼2012-08-16 10:55:12
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