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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的
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yxperfect

新虫 (初入文坛)

[求助] 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的

小分子量蛋白，14kd，1.5mm的胶
电转条件：250mA，湿转，3h30min。
结果只能看到最小分子量26kd的预染Marker，其他大分子量的marker还是看得很清晰的。
是不是转过了啊，，，怎么调整条件，胶有点厚。
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1楼 2012-08-14 17:00:42
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

我以前做湿转的时候35kD蛋白，60V，144mA 45min Very Good；
建议你减小电压，缩短时间，再查查你的NC膜截留分子量是多少，能不能做14KD，建议使用0.2umNC膜，不要用0.45的
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坚强面对生活
9楼2012-09-06 10:03:41
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达
★
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-09-07 06:10:52
引用回帖:
11楼: Originally posted by gaorongbest at 2012-09-06 14:07:15
你的蛋白35KD，144mA 45min 就能转好？用的是预染Marker吗？我们曾有一次用200mA 2h，最后胶上还留着Marker呢！...

我主要关注35kD蛋白，不管那些170,110KD的Marker，我是转好了之后染色看的，70KD一下都转好了
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坚强面对生活
12楼2012-09-07 05:51:47
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