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mmzhang

新虫 (小有名气)

[求助] shRNA有关的问题

本人最近要做RNAi,计划用shRNA来做,以前没有做过,实验室里也没人会,所以想请教大家以下几个问题:
1、应该选择怎样插入的那段序列,同源性低的还是重要的功能域?
2、多长的片段比较合适呢?老板说200bp左右,但是有些方法里说20多个核苷酸?
3、引物设计有什么特殊要求吗?

请各位大侠指点迷津!谢谢!
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tinyys

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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mmzhang: 金币+5, 有帮助 2012-08-13 16:08:47
做RNAi一般有两种方式,一种是体外合成dsRNA(双链RNA),这种RNA长度一般是300到500bp,dsRNA导入到目标内就被dicer切割成了siRNA,大概是22-25bp,就是20多个核苷酸。
另一种就是直接合成siRNA,然后导入目标内。看你选用的方法了。
引物设计的话,你可以去分子生物学区看资源帖,有详细解说。
成长总是伴随一些无奈的
2楼2012-08-13 08:44:36
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