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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 内参引物和目的基因的引物可以放在同一个PCR管中反应吗？？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 内参引物和目的基因的引物可以放在同一个PCR管中反应吗？？ 已有1人参与

本人想做rt-pcr，当做pcr这一步的时候，是否可以将actin基因和我的目的基因的引物放在同一个pcr管中反应呢？？？请各位指教！
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1楼 2012-08-04 23:33:54
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-05 22:06:36
最好别放在同一个管子里，结合效率不同，存在竞争性，可能导致结果不准确。RT-PCR以及real time PCR都要求条件控制严格，尽量一致才有可比性。
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2楼2012-08-05 01:49:05
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-05 01:49:05
最好别放在同一个管子里，结合效率不同，存在竞争性，可能导致结果不准确。RT-PCR以及real time PCR都要求条件控制严格，尽量一致才有可比性。

恩，多谢指教！往后就尽量先不把他们放在一起了！
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3楼2012-08-05 13:47:39
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-05 01:49:05
最好别放在同一个管子里，结合效率不同，存在竞争性，可能导致结果不准确。RT-PCR以及real time PCR都要求条件控制严格，尽量一致才有可比性。

您好，我还想问一个问题，我分了模型组，给药组，正常组，结果模型组的rna条带，不是太亮，正常组的rna条带很亮，给药组rna亮度介于两者之间，结果我也没有去测紫外定量，就取了3ul的模板做RT，然后做PCR的时候模板的量是2ul，结果最后跑电泳的时候没有条带，就有个别的几条带可以看见，我想问一下是不是我的RNA的量太少了，结果导致cDNA的量太少，做PCR的时候扩增效率不高所致呢？谢谢！
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4楼2012-08-05 14:07:33
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2012-08-05 14:07:33
您好，我还想问一个问题，我分了模型组，给药组，正常组，结果模型组的rna条带，不是太亮，正常组的rna条带很亮，给药组rna亮度介于两者之间，结果我也没有去测紫外定量，就取了3ul的模板做RT，然后做PCR的时候模板 ...

是所有的3个样品PCR都没有条带吗，还是只有模型组没有？如果只是模型组没有，可能是量太少。可以用内标基因检测，循环数降低，如果内标差别不大，就可能是PCR效率不高所致。
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5楼2012-08-05 19:27:07
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

判断是否能将多对引物同时进行扩增反应，其实是基于你所使用的方法，SYBR-Green由于其反应无特异性，故无法用于多重反应，而基于荧光探针的qPCR则可以通过对不同引物的标记来实现多重反应
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6楼2013-12-21 16:35:38
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