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水体细菌总数和活菌数镜检
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| 各位大虾好～小妹为环境专业小硕一枚，最近要做水体和植物根系微生物的分析，导师要求检测：水体游离微生物细菌总数、活细菌染色分析、显微分析鉴定群落特征这几个指标，周六就要去采样了，我只查到DAPI法测总菌，关于采样后的处理和镜检步骤一无所知。我们实验室配备的是ZEISS公司的AXIOSKOP 40\40FL，我从来没用过，实验室也没人做微生物，求各位给予详细指导，愈详细愈好~ |
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 细菌染色 |
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2楼2012-08-02 13:47:57
swnz
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4楼2012-08-02 21:28:17
michaelcyq
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【答案】应助回帖
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guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-05 11:02:27
感谢参与，应助指数 +1
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-05 11:02:27
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水中微生物生物量的测定方法一般包括：稀释培养计数，血球计数板计数，显微镜镜检，或其它间接方法（如磷脂法）等等。 LZ基本上确定了用显微镜法的话就是染色。 DAPI和其它一些染色剂（SYTO9）等能够染出总细菌数，但是无法指示细菌活性。 细菌活性显微镜检测可以采用复合染色法，常用的为SYTO9/PI，这样然出来的绿色(SYTO9)为活菌，红色(PI)为死菌。 不过lz想了解植物根系微生物的话可能简单镜检会碰到困难，因为上述染色剂基本针对细菌，而对于真菌（如内外生菌根真菌）的是否有效我也没有试过。 |
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guochuan1045楼2012-08-03 21:24:00
6楼2012-08-05 09:01:23
7楼2012-08-05 11:04:16
michaelcyq
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guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助, 你们是学生物的吧？真心膜拜~买Baclight的话我得和老师再商量下，看是否必要，头痛~ 2012-08-05 21:47:37
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助, 你们是学生物的吧？真心膜拜~买Baclight的话我得和老师再商量下，看是否必要，头痛~ 2012-08-05 21:47:37
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SYTO9/PI复合染色的原理是： 1、死细胞细胞膜有破损； 2、SYTO9分子小，能够穿透健康细胞膜而和胞内DNA结合，在激光激发下发绿光；同时也能将死细胞染色； 3、PI分子大，只能染细胞膜破损的死细胞，而不能染健康细胞，在激光激发下发红光； 4、对于死细胞，PI分子能够优先于SYTO9结合DNA，因此死细胞多位红色，但是也存在SYTO9和PI同时染色而出现黄色的情况； 基于以上4点，syto9/PI复合染色能够区分死活细胞。 我没有见过用DAPI和PI复合染色的，没准儿是因为DAPI比PI更能和DNA结合使PI无法染上细胞（？不确定），因此不能用来指示死活？ 文献很多，给你几个我们实验室自己做的吧。 Zhang T, Fang HHP. 2004. Quantification of Saccharomyces cerevisiae viability using BacLight. Biotechnology Letters. 26(12), 989-992 Xie XJ, Li YG, Zhang T, Fang HHP. 2006. Bacterial survival in evaporating deposited droplets on a teflon-coated surface. Applied Microbiology and Biotechnology. 73(3), 703-712 Chao Y, Zhang T. 2011. Probing roles of lipopolysaccharide, fimbria and colanic acid in the attachment of Escherichia coli strains on inert surfaces. Langmuir. 27, 11545-11553. 第一个可能对你来说有点启发，因为是用来看酵母死活的，说明真菌类的死活也许可以用这种方法判定。 |
8楼2012-08-05 17:22:47
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