| 查看: 2183 | 回复: 7 | ||||
[求助]
水体细菌总数和活菌数镜检
|
| 各位大虾好～小妹为环境专业小硕一枚，最近要做水体和植物根系微生物的分析，导师要求检测：水体游离微生物细菌总数、活细菌染色分析、显微分析鉴定群落特征这几个指标，周六就要去采样了，我只查到DAPI法测总菌，关于采样后的处理和镜检步骤一无所知。我们实验室配备的是ZEISS公司的AXIOSKOP 40\40FL，我从来没用过，实验室也没人做微生物，求各位给予详细指导，愈详细愈好~ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细菌染色 |
» 猜你喜欢
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有15人回复
-
科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题
已经有14人回复
-
要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够
已经有17人回复
-
基金系统什么内容也没有
已经有10人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有5人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细菌活性鉴定 核酸染料 vs 涂平板
已经有16人回复
- 细菌失活是细菌的产酶能力失去还是指细菌凋亡？
已经有5人回复
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- 芽孢杆菌OD值与活菌数相对应的标准曲线
已经有9人回复
- 科学家仅利用水和细菌制造氢气
已经有3人回复
- 关于区分活死细菌的问题
已经有8人回复
- 如何确定细菌生产淀粉水解酶
已经有4人回复
- 细菌在二次蒸馏水中多久会死掉
已经有10人回复
- 全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
已经有16人回复
- MTT法测活细菌数的具体操作步骤
已经有5人回复
- 【求助】糖果微生物检测中的细菌总数和大肠菌群该用零三年的标准还是二零一零年的标准
已经有4人回复
- 【讨论】菌落总数和细菌总数的区别
已经有8人回复
2楼2012-08-02 13:47:57
swnz
木虫 (小有名气)
- 应助: 34 (小学生)
- 金币: 3364.6
- 红花: 4
- 帖子: 216
- 在线: 53.4小时
- 虫号: 1852661
- 注册: 2012-06-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-08-02 21:26:18
4楼2012-08-02 21:28:17
michaelcyq
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 7153.4
- 散金: 22
- 红花: 4
- 帖子: 153
- 在线: 540.1小时
- 虫号: 1164397
- 注册: 2010-12-07
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-05 11:02:27
感谢参与，应助指数 +1
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-05 11:02:27
|
水中微生物生物量的测定方法一般包括：稀释培养计数，血球计数板计数，显微镜镜检，或其它间接方法（如磷脂法）等等。 LZ基本上确定了用显微镜法的话就是染色。 DAPI和其它一些染色剂（SYTO9）等能够染出总细菌数，但是无法指示细菌活性。 细菌活性显微镜检测可以采用复合染色法，常用的为SYTO9/PI，这样然出来的绿色(SYTO9)为活菌，红色(PI)为死菌。 不过lz想了解植物根系微生物的话可能简单镜检会碰到困难，因为上述染色剂基本针对细菌，而对于真菌（如内外生菌根真菌）的是否有效我也没有试过。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
guochuan1045楼2012-08-03 21:24:00
6楼2012-08-05 09:01:23
7楼2012-08-05 11:04:16
michaelcyq
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 7153.4
- 散金: 22
- 红花: 4
- 帖子: 153
- 在线: 540.1小时
- 虫号: 1164397
- 注册: 2010-12-07
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助, 你们是学生物的吧？真心膜拜~买Baclight的话我得和老师再商量下，看是否必要，头痛~ 2012-08-05 21:47:37
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助, 你们是学生物的吧？真心膜拜~买Baclight的话我得和老师再商量下，看是否必要，头痛~ 2012-08-05 21:47:37
|
SYTO9/PI复合染色的原理是： 1、死细胞细胞膜有破损； 2、SYTO9分子小，能够穿透健康细胞膜而和胞内DNA结合，在激光激发下发绿光；同时也能将死细胞染色； 3、PI分子大，只能染细胞膜破损的死细胞，而不能染健康细胞，在激光激发下发红光； 4、对于死细胞，PI分子能够优先于SYTO9结合DNA，因此死细胞多位红色，但是也存在SYTO9和PI同时染色而出现黄色的情况； 基于以上4点，syto9/PI复合染色能够区分死活细胞。 我没有见过用DAPI和PI复合染色的，没准儿是因为DAPI比PI更能和DNA结合使PI无法染上细胞（？不确定），因此不能用来指示死活？ 文献很多，给你几个我们实验室自己做的吧。 Zhang T, Fang HHP. 2004. Quantification of Saccharomyces cerevisiae viability using BacLight. Biotechnology Letters. 26(12), 989-992 Xie XJ, Li YG, Zhang T, Fang HHP. 2006. Bacterial survival in evaporating deposited droplets on a teflon-coated surface. Applied Microbiology and Biotechnology. 73(3), 703-712 Chao Y, Zhang T. 2011. Probing roles of lipopolysaccharide, fimbria and colanic acid in the attachment of Escherichia coli strains on inert surfaces. Langmuir. 27, 11545-11553. 第一个可能对你来说有点启发，因为是用来看酵母死活的，说明真菌类的死活也许可以用这种方法判定。 |
8楼2012-08-05 17:22:47
30