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guochuan104

新虫 (初入文坛)

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[求助] 水体细菌总数和活菌数镜检

各位大虾好～小妹为环境专业小硕一枚，最近要做水体和植物根系微生物的分析，导师要求检测：水体游离微生物细菌总数、活细菌染色分析、显微分析鉴定群落特征这几个指标，周六就要去采样了，我只查到DAPI法测总菌，关于采样后的处理和镜检步骤一无所知。我们实验室配备的是ZEISS公司的AXIOSKOP 40\40FL，我从来没用过，实验室也没人做微生物，求各位给予详细指导，愈详细愈好~

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1楼 2012-08-02 09:43:49

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michaelcyq

铁杆木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
guochuan104: 金币+5, ★★★很有帮助, 你们是学生物的吧？真心膜拜~买Baclight的话我得和老师再商量下，看是否必要，头痛~ 2012-08-05 21:47:37

引用回帖:

6楼: Originally posted by guochuan104 at 2012-08-05 09:01:23
我查了下Baclight试剂盒很贵，我可不可以用DAPI/PI染色，DAPI染总菌，PI染活菌呢？如果可以的话，具体操作上应该注意什么呢？有木有什么文献可以给我参考参考的？谢谢这位木虫~...

SYTO9/PI复合染色的原理是：
1、死细胞细胞膜有破损；
2、SYTO9分子小，能够穿透健康细胞膜而和胞内DNA结合，在激光激发下发绿光；同时也能将死细胞染色；
3、PI分子大，只能染细胞膜破损的死细胞，而不能染健康细胞，在激光激发下发红光；
4、对于死细胞，PI分子能够优先于SYTO9结合DNA，因此死细胞多位红色，但是也存在SYTO9和PI同时染色而出现黄色的情况；
基于以上4点，syto9/PI复合染色能够区分死活细胞。
我没有见过用DAPI和PI复合染色的，没准儿是因为DAPI比PI更能和DNA结合使PI无法染上细胞（？不确定），因此不能用来指示死活？
文献很多，给你几个我们实验室自己做的吧。
Zhang T, Fang HHP. 2004. Quantification of Saccharomyces cerevisiae viability using BacLight. Biotechnology Letters. 26(12), 989-992
Xie XJ, Li YG, Zhang T, Fang HHP. 2006. Bacterial survival in evaporating deposited droplets on a teflon-coated surface. Applied Microbiology and Biotechnology. 73(3), 703-712
Chao Y, Zhang T. 2011. Probing roles of lipopolysaccharide, fimbria and colanic acid in the attachment of Escherichia coli strains on inert surfaces. Langmuir. 27, 11545-11553.
第一个可能对你来说有点启发，因为是用来看酵母死活的，说明真菌类的死活也许可以用这种方法判定。