24小时热门版块排行榜    

查看: 824  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wangmin2010

新虫 (小有名气)

[求助] 原核载体构建

求助:
    我现在在构建一个原核载体,是氯霉素抗性的,我用的是KpnI,XbaI这两个酶,我一直用的传统的方法,可就是连不上,PCR回收在酶切,质粒酶切,单酶切,都试过了,就是连不上,请问高手们,有没有遇到过这样的问题啊1
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

自己的人生是要靠自己改变的!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangmin2010

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-08-01 00:01:57
克隆不成功最常见的原因是载体或PCR产物酶切不完全。
载体酶切时,最难得部分是如何判断载体是否完全酶切的方法,因为只有载体的完全双酶切,才能保证较高的克隆效率,减少假阳性。
一般来说,可以通过电泳分析来 ...

谢谢,我试试吧,之前我试过分部酶切,先用KpnI切四个小时,然后回收,在用XbaI酶切三个小时回收,然后在做连接,可是还是失败。
自己的人生是要靠自己改变的!
9楼2012-08-01 19:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

wangmin2010

新虫 (小有名气)

恩,在看呢,可是我还是找不到我的问题出在了什么地方?
自己的人生是要靠自己改变的!
2楼2012-07-31 19:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangmin2010

新虫 (小有名气)

目的片段是1.4K,载体是3K,酶切回收后条带挺亮的,连接体系是10ul,各种比例都试过了,但板上什么都不长,
自己的人生是要靠自己改变的!
3楼2012-07-31 20:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是感受态的问题,一般连不上就是这些问题。
coasttocoast。
4楼2012-07-31 21:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
请填处理意见