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wangmin2010

新虫 (小有名气)

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虫号: 1197771
注册: 2011-01-29
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[求助] 原核载体构建

求助：
我现在在构建一个原核载体，是氯霉素抗性的，我用的是KpnI,XbaI这两个酶，我一直用的传统的方法，可就是连不上，PCR回收在酶切，质粒酶切，单酶切，都试过了，就是连不上，请问高手们，有没有遇到过这样的问题啊1

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自己的人生是要靠自己改变的！

1楼 2012-07-31 19:39:49

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wangmin2010

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-08-01 00:01:57
克隆不成功最常见的原因是载体或PCR产物酶切不完全。
载体酶切时，最难得部分是如何判断载体是否完全酶切的方法，因为只有载体的完全双酶切，才能保证较高的克隆效率，减少假阳性。
一般来说，可以通过电泳分析来 ...

谢谢，我试试吧，之前我试过分部酶切，先用KpnI切四个小时，然后回收，在用XbaI酶切三个小时回收，然后在做连接，可是还是失败。