应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
181/2返回列表12下一页
查看: 4887  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaojo

新虫 (初入文坛)

[求助] PAGE胶回收的具体步骤

各位前辈，有没有人做过PAGE胶回收啊？我要回收甲基化的片段，已经从胶上挖了几十个条带了，放在1.5ml的离心管里，-20℃冰箱。现在要做回收了，有如下问题：
    1.PAGE的条带挖出来能放在-20℃冰箱吗？一般能存放多久？
    2.回收之后还要跑PCR，要使DNA溶解出来具体怎样处理？是加TE溶解再60℃水浴1小时吗？一般加多少TE合适？
    3.水浴后离心要取上清跑PCR，但是一般就是取几微升，那剩下的DNA要如何保存呢？
   还请各位前辈多多指点，这三伏天在实验室跑大板子不容易啊~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-20 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L
染色液：4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液：把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中，在使用前几分钟，加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程：
1.        固定：将附着凝胶的玻璃板放入固定液中，置于摇床上振荡约5min；
2.        染色：将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中，放在摇床上振荡，染色8-12min；
3.        漂洗：将玻璃板放入蒸馏水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍沥干；
4.        显色：在漂洗将要结束时，将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中，混匀后，将玻璃板置于显色液中，轻轻摇动，至条带完全清晰；
5.        晾干，拍照或者扫描保存。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2014-01-14 16:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:11
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
coasttocoast。
2楼2012-07-20 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

非常感谢啊！！
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后，离心，是把上清都取出来，转移到新的离心管里吗？剩下的胶就可以扔了是吗？还是可以取胶的一部分用来溶解，剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊？
我的问题有点多，呵呵~~
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-20 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以上网去查一下这篇文献：一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法，对你可能会有帮助的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
4楼2012-07-20 11:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:24
分子克隆3上有详细的protocol。简答来说就是把胶切小（不能切碎。离心不下去）用（NH4）Ac溶液重悬，振荡过夜将DNA扩散出来，再用乙醇沉淀DNA。祝顺利
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
5楼2012-07-20 11:18:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaojo at 2012-07-20 11:00:57
非常感谢啊！！
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后，离心，是把上清都取出来，转移到新的离心管里吗？剩下的胶就可以扔了是吗？还是可以取胶的一部分用来溶解，剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊？
我 ...

可以转移的，剩下的也冻存起来，以防万一吗。冻存起来放置的时间半年没问题。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
6楼2012-07-20 11:36:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-20 11:17:51
你可以上网去查一下这篇文献：一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法，对你可能会有帮助的

已经下载了这篇文献，真的很有帮助，谢谢啊！
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-20 15:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by ranger04 at 2012-07-20 11:18:34
分子克隆3上有详细的protocol。简答来说就是把胶切小（不能切碎。离心不下去）用（NH4）Ac溶液重悬，振荡过夜将DNA扩散出来，再用乙醇沉淀DNA。祝顺利

分子克隆实验指南第三版，我有呢，在哪页啊？我之前没找着呢。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-20 15:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 11:36:15
可以转移的，剩下的也冻存起来，以防万一吗。冻存起来放置的时间半年没问题。...

啊。那我就放心了，我还怕给冻坏了呢。呵呵，谢谢前辈！
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-20 15:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

谢谢楼主，再请教一个问题，这个种回收方法，是用哪种染色可以呢？银染还是亚甲蓝染色？
赞一下 回复此楼
10楼2014-01-10 21:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaojo 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-11 7/350 2026-03-17 01:27 by 学员FnSWZj
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭