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xiaojo

新虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-10 21:46:35
谢谢楼主,再请教一个问题,这个种回收方法,是用哪种染色可以呢?银染还是亚甲蓝染色?...

在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)之后采用的是银染,目的条带回收之后再扩增,可进行琼脂糖电泳检测。
11楼2014-01-13 11:55:10
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-13 11:55:10
在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)之后采用的是银染,目的条带回收之后再扩增,可进行琼脂糖电泳检测。...

是啊,今天试了一下亚甲基蓝染色,但是效果不是很好,条带和背景分不太清楚,以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么?
12楼2014-01-13 22:31:01
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

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12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊,今天试了一下亚甲基蓝染色,但是效果不是很好,条带和背景分不太清楚,以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么?...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你,因为我做的是大板子,你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备:
四个塑料方盒(比玻璃板面积稍大),2个2L的烧杯,摇床
试剂的准备:
固定液:200ml乙醇,10ml冰醋酸,加水至2L
染色液:4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液:把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中,在使用前几分钟,加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程:
1.        固定:将附着凝胶的玻璃板放入固定液中,置于摇床上振荡约5min;
2.        染色:将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中,放在摇床上振荡,染色8-12min;
3.        漂洗:将玻璃板放入蒸馏水中,漂洗1-2min,取出玻璃板,稍稍沥干;
4.        显色:在漂洗将要结束时,将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中,混匀后,将玻璃板置于显色液中,轻轻摇动,至条带完全清晰;
5.        晾干,拍照或者扫描保存。
13楼2014-01-14 16:48:56
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-14 16:48:56
我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你,因为我做的是大板子,你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备:
四个塑料方盒(比玻璃板面积稍大),2个2L的烧杯,摇床
试剂的准备:
固定液:2 ...

太感谢了,我明天就去试试。
14楼2014-01-16 23:14:56
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漂_浮

新虫 (小有名气)

有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-01-17 07:59:56
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-16 23:14:56
太感谢了,我明天就去试试。...

不客气,你可以先试试。
16楼2014-01-18 10:37:40
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 漂_浮 at 2014-01-17 07:59:56
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

是的,但是一直没买过,不知道好不好用。我用的是50cm*60cm的玻璃板,操作起来很费劲,染色费药品还费水,估计试剂盒不够我用几次的。
17楼2014-01-18 10:57:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

哎呀,应该是三九天吧。。。冬练三九,夏练三伏。。
18楼2014-01-18 11:30:52
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