应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
182/2返回列表上一页12
查看: 5237  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-10 21:46:35
谢谢楼主，再请教一个问题，这个种回收方法，是用哪种染色可以呢？银染还是亚甲蓝染色？...

在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。
赞一下 回复此楼
11楼2014-01-13 11:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-13 11:55:10
在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。...

是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？
赞一下 回复此楼
12楼2014-01-13 22:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L
染色液：4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液：把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中，在使用前几分钟，加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程：
1.        固定：将附着凝胶的玻璃板放入固定液中，置于摇床上振荡约5min；
2.        染色：将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中，放在摇床上振荡，染色8-12min；
3.        漂洗：将玻璃板放入蒸馏水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍沥干；
4.        显色：在漂洗将要结束时，将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中，混匀后，将玻璃板置于显色液中，轻轻摇动，至条带完全清晰；
5.        晾干，拍照或者扫描保存。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2014-01-14 16:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-14 16:48:56
我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：2 ...

太感谢了，我明天就去试试。
赞一下 回复此楼
14楼2014-01-16 23:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漂_浮

新虫 (小有名气)
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2014-01-17 07:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-16 23:14:56
太感谢了，我明天就去试试。...

不客气，你可以先试试。
赞一下 回复此楼
16楼2014-01-18 10:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 漂_浮 at 2014-01-17 07:59:56
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

是的，但是一直没买过，不知道好不好用。我用的是50cm*60cm的玻璃板，操作起来很费劲，染色费药品还费水，估计试剂盒不够我用几次的。
赞一下 回复此楼
17楼2014-01-18 10:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
哎呀，应该是三九天吧。。。冬练三九，夏练三伏。。
赞一下 回复此楼
18楼2014-01-18 11:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaojo 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭