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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
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xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-10 21:46:35
谢谢楼主，再请教一个问题，这个种回收方法，是用哪种染色可以呢？银染还是亚甲蓝染色？...

在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。
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11楼2014-01-13 11:55:10
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-13 11:55:10
在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。...

是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？
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12楼2014-01-13 22:31:01
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xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L
染色液：4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液：把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中，在使用前几分钟，加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程：
1.        固定：将附着凝胶的玻璃板放入固定液中，置于摇床上振荡约5min；
2.        染色：将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中，放在摇床上振荡，染色8-12min；
3.        漂洗：将玻璃板放入蒸馏水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍沥干；
4.        显色：在漂洗将要结束时，将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中，混匀后，将玻璃板置于显色液中，轻轻摇动，至条带完全清晰；
5.        晾干，拍照或者扫描保存。
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13楼2014-01-14 16:48:56
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-14 16:48:56
我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：2 ...

太感谢了，我明天就去试试。
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14楼2014-01-16 23:14:56
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漂_浮

新虫 (小有名气)
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
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15楼2014-01-17 07:59:56
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xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-16 23:14:56
太感谢了，我明天就去试试。...

不客气，你可以先试试。
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16楼2014-01-18 10:37:40
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xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 漂_浮 at 2014-01-17 07:59:56
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

是的，但是一直没买过，不知道好不好用。我用的是50cm*60cm的玻璃板，操作起来很费劲，染色费药品还费水，估计试剂盒不够我用几次的。
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17楼2014-01-18 10:57:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
哎呀，应该是三九天吧。。。冬练三九，夏练三伏。。
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18楼2014-01-18 11:30:52
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