应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
182/2返回列表上一页12
查看: 5186  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-10 21:46:35
谢谢楼主，再请教一个问题，这个种回收方法，是用哪种染色可以呢？银染还是亚甲蓝染色？...

在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。
赞一下 回复此楼
11楼2014-01-13 11:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-13 11:55:10
在我这个实验中聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）之后采用的是银染，目的条带回收之后再扩增，可进行琼脂糖电泳检测。...

是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？
赞一下 回复此楼
12楼2014-01-13 22:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L
染色液：4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液：把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中，在使用前几分钟，加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程：
1.        固定：将附着凝胶的玻璃板放入固定液中，置于摇床上振荡约5min；
2.        染色：将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中，放在摇床上振荡，染色8-12min；
3.        漂洗：将玻璃板放入蒸馏水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍沥干；
4.        显色：在漂洗将要结束时，将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中，混匀后，将玻璃板置于显色液中，轻轻摇动，至条带完全清晰；
5.        晾干，拍照或者扫描保存。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2014-01-14 16:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojo at 2014-01-14 16:48:56
我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：2 ...

太感谢了，我明天就去试试。
赞一下 回复此楼
14楼2014-01-16 23:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漂_浮

新虫 (小有名气)
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2014-01-17 07:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-16 23:14:56
太感谢了，我明天就去试试。...

不客气，你可以先试试。
赞一下 回复此楼
16楼2014-01-18 10:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 漂_浮 at 2014-01-17 07:59:56
有试剂盒的  怕麻烦的话可以直接买试剂盒  按上面的操作就行了

是的，但是一直没买过，不知道好不好用。我用的是50cm*60cm的玻璃板，操作起来很费劲，染色费药品还费水，估计试剂盒不够我用几次的。
赞一下 回复此楼
17楼2014-01-18 10:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
哎呀，应该是三九天吧。。。冬练三九，夏练三伏。。
赞一下 回复此楼
18楼2014-01-18 11:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaojo 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 18/900 2026-08-01 13:56 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 8/400 2026-08-01 13:53 by y4XuShGyllvT
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:51 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:51 by y4XuShGyllvT
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 7/350 2026-08-01 13:49 by y4XuShGyllvT
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:49 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +16 1234567wang 2026-07-25 20/1000 2026-08-01 08:57 by type2type
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭