应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
52/1返回列表
查看: 5355  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)

[求助] PAGE胶回收的具体步骤

各位前辈，有没有人做过PAGE胶回收啊？我要回收甲基化的片段，已经从胶上挖了几十个条带了，放在1.5ml的离心管里，-20℃冰箱。现在要做回收了，有如下问题：
    1.PAGE的条带挖出来能放在-20℃冰箱吗？一般能存放多久？
    2.回收之后还要跑PCR，要使DNA溶解出来具体怎样处理？是加TE溶解再60℃水浴1小时吗？一般加多少TE合适？
    3.水浴后离心要取上清跑PCR，但是一般就是取几微升，那剩下的DNA要如何保存呢？
   还请各位前辈多多指点，这三伏天在实验室跑大板子不容易啊~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-20 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2014-01-13 22:31:01
是啊，今天试了一下亚甲基蓝染色，但是效果不是很好，条带和背景分不太清楚，以后可以试试银染。请问银染之后的脱色步骤和蛋白电泳一样么？...

我没有做过蛋白电泳哎。把我银染的方法发给你，因为我做的是大板子，你的玻璃板要是小的话可以相应比例的减少量。
仪器和设备：
四个塑料方盒（比玻璃板面积稍大），2个2L的烧杯，摇床
试剂的准备：
固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L
染色液：4g AgNO3至2L蒸馏水中
显色液：把30g NaOH 溶于2L蒸馏水中，在使用前几分钟，加入终浓度为0.4%的甲醛溶液。
染色过程：
1.        固定：将附着凝胶的玻璃板放入固定液中，置于摇床上振荡约5min；
2.        染色：将玻璃板放入准备好的装有染色液的塑料盒中，放在摇床上振荡，染色8-12min；
3.        漂洗：将玻璃板放入蒸馏水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍沥干；
4.        显色：在漂洗将要结束时，将20ml 37%甲醛加入准备好的NaOH溶液中，混匀后，将玻璃板置于显色液中，轻轻摇动，至条带完全清晰；
5.        晾干，拍照或者扫描保存。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2014-01-14 16:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:11
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
coasttocoast。
2楼2012-07-20 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

非常感谢啊！！
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后，离心，是把上清都取出来，转移到新的离心管里吗？剩下的胶就可以扔了是吗？还是可以取胶的一部分用来溶解，剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊？
我的问题有点多，呵呵~~
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-20 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以上网去查一下这篇文献：一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法，对你可能会有帮助的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
4楼2012-07-20 11:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:47 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:35 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:23 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:15 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:13 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭