应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE胶回收的具体步骤
51/1返回列表
查看: 5133  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)

[求助] PAGE胶回收的具体步骤

各位前辈，有没有人做过PAGE胶回收啊？我要回收甲基化的片段，已经从胶上挖了几十个条带了，放在1.5ml的离心管里，-20℃冰箱。现在要做回收了，有如下问题：
    1.PAGE的条带挖出来能放在-20℃冰箱吗？一般能存放多久？
    2.回收之后还要跑PCR，要使DNA溶解出来具体怎样处理？是加TE溶解再60℃水浴1小时吗？一般加多少TE合适？
    3.水浴后离心要取上清跑PCR，但是一般就是取几微升，那剩下的DNA要如何保存呢？
   还请各位前辈多多指点，这三伏天在实验室跑大板子不容易啊~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-20 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:24
分子克隆3上有详细的protocol。简答来说就是把胶切小（不能切碎。离心不下去）用（NH4）Ac溶液重悬，振荡过夜将DNA扩散出来，再用乙醇沉淀DNA。祝顺利
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
5楼2012-07-20 11:18:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:11
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
coasttocoast。
2楼2012-07-20 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaojo

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

非常感谢啊！！
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后，离心，是把上清都取出来，转移到新的离心管里吗？剩下的胶就可以扔了是吗？还是可以取胶的一部分用来溶解，剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊？
我的问题有点多，呵呵~~
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-20 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以上网去查一下这篇文献：一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法，对你可能会有帮助的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiaojo
4楼2012-07-20 11:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭