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xiaojo

新虫 (初入文坛)

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[求助] PAGE胶回收的具体步骤

各位前辈，有没有人做过PAGE胶回收啊？我要回收甲基化的片段，已经从胶上挖了几十个条带了，放在1.5ml的离心管里，-20℃冰箱。现在要做回收了，有如下问题：
1.PAGE的条带挖出来能放在-20℃冰箱吗？一般能存放多久？
2.回收之后还要跑PCR，要使DNA溶解出来具体怎样处理？是加TE溶解再60℃水浴1小时吗？一般加多少TE合适？
3.水浴后离心要取上清跑PCR，但是一般就是取几微升，那剩下的DNA要如何保存呢？
还请各位前辈多多指点，这三伏天在实验室跑大板子不容易啊~

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1楼 2012-07-20 10:29:27

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ranger04

金虫 (小有名气)

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专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:24

分子克隆3上有详细的protocol。简答来说就是把胶切小（不能切碎。离心不下去）用（NH4）Ac溶液重悬，振荡过夜将DNA扩散出来，再用乙醇沉淀DNA。祝顺利

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xiaojo

5楼2012-07-20 11:18:34

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查看全部 18 个回答

tupac225

金虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 免疫生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:11

把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

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xiaojo

coasttocoast。

2楼2012-07-20 10:51:50

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xiaojo

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了，一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

非常感谢啊！！
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后，离心，是把上清都取出来，转移到新的离心管里吗？剩下的胶就可以扔了是吗？还是可以取胶的一部分用来溶解，剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊？
我的问题有点多，呵呵~~

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3楼2012-07-20 11:00:57

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jl860822

金虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你可以上网去查一下这篇文献：一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法，对你可能会有帮助的

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xiaojo

4楼2012-07-20 11:17:51

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