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xiaojo

新虫 (初入文坛)

[求助] PAGE胶回收的具体步骤

各位前辈,有没有人做过PAGE胶回收啊?我要回收甲基化的片段,已经从胶上挖了几十个条带了,放在1.5ml的离心管里,-20℃冰箱。现在要做回收了,有如下问题:
    1.PAGE的条带挖出来能放在-20℃冰箱吗?一般能存放多久?
    2.回收之后还要跑PCR,要使DNA溶解出来具体怎样处理?是加TE溶解再60℃水浴1小时吗?一般加多少TE合适?
    3.水浴后离心要取上清跑PCR,但是一般就是取几微升,那剩下的DNA要如何保存呢?
   还请各位前辈多多指点,这三伏天在实验室跑大板子不容易啊~
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by ranger04 at 2012-07-20 11:18:34
分子克隆3上有详细的protocol。简答来说就是把胶切小(不能切碎。离心不下去)用(NH4)Ac溶液重悬,振荡过夜将DNA扩散出来,再用乙醇沉淀DNA。祝顺利

分子克隆实验指南第三版,我有呢,在哪页啊?我之前没找着呢。
8楼2012-07-20 15:28:51
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:48:11
把条带切下来,加TE,尽量弄碎,下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃,4℃反复冻融三次,每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了,一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

coasttocoast。
2楼2012-07-20 10:51:50
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-20 10:51:50
把条带切下来,加TE,尽量弄碎,下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃,4℃反复冻融三次,每次1h
PCR的时候取1μL作为模板。
te加入30ul就可以了,一般看你切胶的大小。
dna放te中就可以了。

非常感谢啊!!
我还有个疑问啊。就是用TE溶解胶之后,离心,是把上清都取出来,转移到新的离心管里吗?剩下的胶就可以扔了是吗?还是可以取胶的一部分用来溶解,剩下的可以保存。一般胶放-20℃能放置多久啊?
我的问题有点多,呵呵~~
3楼2012-07-20 11:00:57
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以上网去查一下这篇文献:一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法,对你可能会有帮助的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-07-20 11:17:51
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