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elalei1999

铜虫 (小有名气)

[求助] Southern求助

各位大侠,小弟初做Southern,用的是罗氏的地高辛试剂盒(CSPD),用柯达4000MM的CCD成像系统,化学发光成像,可是在显色的时候整个尼龙膜+都是亮的,看不到任何条带和斑点,如图,请大家帮我分析一下原因吧,我都是按照说明说上来做的,是不是有什么地方没注意到。谢谢了。
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能你的机器调的不对。曝光时间太长了。
coasttocoast。
2楼2012-07-19 07:54:37
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elalei1999

铜虫 (小有名气)

谢谢,我的曝光时间5分钟。
另外我在不开启EPI的情况下,没有任何曝光图像出现,只是一片雪花,这是什么问题呢。做探针标记效率检测的时候有什么要注意的吗?
谢谢
不抛弃,不放弃!
3楼2012-07-19 12:46:03
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elalei1999

铜虫 (小有名气)

在做southern,采用落实的化学发光试剂盒,先做了探针标记效率的确定实验,上成像仪检测,什么都没有,全是雪花,请问各位帮我分析一下原因吧。
不抛弃,不放弃!
4楼2012-07-19 14:31:37
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elalei1999

铜虫 (小有名气)

各位大侠,我现在初学做southern blot,罗氏地高辛检测试剂盒(CSPD),尼龙+膜,用KODAK Image Station 4000MM 来检测,现在在做探针标记效率的确定,包括试剂盒里的DIG标记的对照DNA在内,还有我的探针,化学发光成像检测什么都看不到,只有雪花般的图,没有任何成像。然后还压了X光片,曝光半小时,也是什么都没有。求助,请问大家,除了用这个试剂盒里的试剂做southern,还需要别的试剂吗,比如抗体之类的?
标记效率做了几次了,结果都是什么没有,我都是按照说明书上的操作说明来做的,不知道原因在哪,还是我有些需要注意的地方没做到,请大家给支支招吧。
还有就是请问使用4000MM可以用来检测southern CSPD的结果吗?有哪位用这个仪器,求指教。
谢谢。





不抛弃,不放弃!
5楼2012-07-20 11:53:18
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elalei1999

铜虫 (小有名气)

弱问:罗氏DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II,有有效期吗?
不抛弃,不放弃!
6楼2012-07-23 17:01:30
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ningxiao7308

铜虫 (小有名气)

敢问楼主这个问题解决了吗
7楼2012-07-24 10:23:26
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长青树

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

回五楼的话,肯定有有效期的,如果放在-20度保存,估计问题不会太大的。
8楼2012-07-24 12:36:00
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elalei1999

铜虫 (小有名气)

难道是我的在运输过程中失效了??无解啊。
不抛弃,不放弃!
9楼2012-07-25 17:06:08
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)

内容已删除
10楼2013-07-09 09:06:41
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