24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1297  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jia8817091

金虫 (小有名气)

[求助] 关于实时定量PCR的问题!!!

小弟刚开始做real time 。现在有个问题,由于我的模板比较多,40多个,如果每个做2个平行的话就是90个左右。可是我们这bio-rad的荧光PCR是96孔,所以每次只能做一个基因。

我想问:1.可不可以这一次只做目的基因,下一次再全做内参基因呢?
        2.如果目的基因和内参基因的退火温度不一样,能不能一起分析啊?
谢谢大家帮帮我吧!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jia8817091: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-17 16:07:44
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-18 13:41:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by jia8817091 at 2012-07-17 12:56:54
我可能说的不是很清楚,我的意思是开始我用机器摸出来了几个基因各自的最适退火温度,比如说我的基因1退火58度,内参退火60度。那么我想说我第一次做用58度做了一批基因1,然后第二次再用60度做了同样模板的内参, ...

引物差1 ,2 度,Ct值其实是差不多的(扩增产物在这个温度上下浮动范围内都有很好的扩增,也就是目的条带都很亮),做相对定量就是做的一个相对的表达量,如果你不是需要绝度精确的实验数据,高于10倍的表达量和9.8倍的表达量,我认为你在(例如退火58-60度之间)做试验是一样的,也就是说你的内参基因做3次重复就可以了,以后只做目的基因的就OK了
5楼2012-07-17 14:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jia8817091: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-17 12:57:05
那你就做完一次目的基因和内参基因,再做一次,共重复3次。
2楼2012-07-17 12:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia8817091

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小虫子666 at 2012-07-17 12:37:48
那你就做完一次目的基因和内参基因,再做一次,共重复3次。

我可能说的不是很清楚,我的意思是开始我用机器摸出来了几个基因各自的最适退火温度,比如说我的基因1退火58度,内参退火60度。那么我想说我第一次做用58度做了一批基因1,然后第二次再用60度做了同样模板的内参,在保证他们阈值相同的情况下,能否用deltadeltaCt法分析?(问题就是这两基因温度不同,可以吗?)
3楼2012-07-17 12:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuanyu0202

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jia8817091: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-17 18:27:27
一般来说做这种实验内参和目的基因都是同条件处理的,建议取一个比较集中的温度,把一个样本的所有基因都跑完,不行的引物再单独检测,当然同一个模板不同的板子不同的退火温度肯定都要设内参的。
4楼2012-07-17 14:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +15 河南农业大学-能 2026-04-14 15/750 2026-04-20 12:39 by Equinoxhua
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 通信工程求调剂!!! +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
信息提示
请填处理意见