| 查看: 1927 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
连接产物双酶切
|
||
|
请教各位大侠： 近期做基因和真核表达载体连接实验已有个把个月，由于真核表达载体用的是pEGFP-N1，大小有4.7bp，插入的载体有2.4bp，分子量过大，导致很难连接上，重复做了四五周期连接实验；最近一次的连接产物跑胶出来三条带，貌似连接上了，之后把连接产物双酶切，跑胶显示两条带，且分子量一个为载体分子量，另一个为插入片段分子量，初步验证连接上，故送菌液去测序，但是测序结果出来只有载体的信息无任何插入基因的信息，显示好像没连接上，近期实验做的焦头烂额的，想请教大家原因，小女不胜感激～～～ |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 双酶切跑胶.bmp
2012-07-17 10:58:35, 433.05 K
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有101人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 有谁试过双酶切的同时加碱性磷酸酶
已经有4人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 纯化后酶切产物的保存
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】pcr,酶切，连接，哪步可以省？
已经有13人回复
tianyinghu
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 527.5
- 红花: 1
- 帖子: 52
- 在线: 43.9小时
- 虫号: 502164
- 注册: 2008-02-14
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-07-18 13:49:11
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-07-18 13:49:11
|
pEGFP-N1，大小有4.7kp，插入的载体有2.4kp,说实在的片段一点也不大，这个载体我经常用，比较好连接的，从你电泳的图很容易看出问题： 载体建议你加到150ng，你的图上直接看出载体加的太多了，不知道你板长的怎么样，片段随便你怎么加，必定片段比较大，一般DL2000的MK最上面的2KB条带是50ng每ul，所以你的载体估计都加到500ng以上了，还有连接后不用跑胶检查，直接转化就可以，严谨点的做个载体空白对照。然后做菌落PCR简单，再送测序。一般连接产物跑胶是显现湖装的，就想往上的拖尾PCR一样。 |
西交-flx4楼2012-07-17 15:31:59
2楼2012-07-17 11:26:45
tupac225
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 103 (高中生)
- 金币: 1967.9
- 散金: 20
- 红花: 4
- 帖子: 460
- 在线: 175.3小时
- 虫号: 1533370
- 注册: 2011-12-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2012-07-17 11:33:41
5楼2012-07-17 16:37:31
