24小时热门版块排行榜    

查看: 872  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)


[交流] 从鲫鱼大脑提取RNA ,有人有这方面的经验吗?

我想从鲫鱼大脑提取RNA,用兼并引物来扩增某个未知的基因。哪位大哥有这方面的实验经历嘛,偶是新手,提取RNA的经验,我的杀多少条鱼啊,谢谢有经验的战友给予建议。直接把头剪下来?谢谢给予指导。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boyzoe

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by fengyunqb at 2012-07-16 13:59:21
非常感谢你的建议,我现在摸索初期,你的只言片语也会给我带来莫大的帮助,谢谢。没多少金币。

我得先去买两条鱼来试试手。有一个问题,我直接去菜场买鱼的话,怎么保证每次买的都是一样的鱼呢,即使是鲫 ...

鱼的脑结构都差不多 品种间差异就更小了
所以不用在意品种的差别

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2012-07-16 18:00:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

tupac225

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-16 13:41:38
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:03
取脑:打开头骨,用镊子取出鱼脑即可。
硫氰酸胍-酚-氯仿法在制备用于反转录PCR的RNA时最实用,建议用这种方法。其他的就是研磨鱼脑准备鱼脑的RNA提取,希望有帮助。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-07-15 14:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-15 14:08:46
取脑:打开头骨,用镊子取出鱼脑即可。
硫氰酸胍-酚-氯仿法在制备用于反转录PCR的RNA时最实用,建议用这种方法。其他的就是研磨鱼脑准备鱼脑的RNA提取,希望有帮助。

你好,你真厉害,估计也做过。下面是我师兄做过斑马鱼的RNA提取。不知道我可不可以照搬。不过斑马鱼小,像手指头那么大。

1:斑马鱼、2:液氮冻死、3:剪头、4:缓冲液buffer研磨(冰上进行)、5:离心1400rpm、6:取沉淀、7:重复345、8:把沉淀放到裂解液(bufferB)、9:研磨、10:100000g离心、11:取上清12:100%TCA150ul混匀13:12000rpm 20min 弃上清14:加500ul丙酮15:37℃烘箱五分钟16:加入60ul Loading buffer 煮沸5min。。。

谢谢你的建议,我查了硫氰酸胍-酸性酚-氯仿法。网上有完整步骤。不过那个dT纤维柱得自己买,肯定要很多银子吧。谢谢你一直以来的帮助。
3楼2012-07-15 16:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boyzoe

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验,很热心哦 2012-07-16 13:42:10
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:08
给你个建议 少弄点材料 新手总是认为材料越多越好
头盖骨揭开就可以看到白色豆腐状的脑
鱼的脑分大 间 中 小 延五部脑 建议先看下鱼类解剖的资料
要是一起弄的话 体积会很大
一般提RNA 只要绿豆一半大的材料加1ml  trizol就行了
材料:trizol太多了的话 也会因裂解不完全引起降解的
扩基因的话 杀一条鱼即可

因为同是做鱼的 所以还是回一下 呵呵

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-07-15 21:22:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错,点赞! +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题,请指教! 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[基金申请] 情人节自我反思:在爱情中有过遗憾吗? +4 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-15 22:28 by baiboxie
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
请填处理意见