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[交流]
从鲫鱼大脑提取RNA ,有人有这方面的经验吗？
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我想从鲫鱼大脑提取RNA，用兼并引物来扩增某个未知的基因。哪位大哥有这方面的实验经历嘛，偶是新手，提取RNA的经验，我的杀多少条鱼啊，谢谢有经验的战友给予建议。直接把头剪下来？ 谢谢给予指导。 |
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2楼2012-07-15 14:08:46
送鲜花一朵 |
你好，你真厉害，估计也做过。下面是我师兄做过斑马鱼的RNA提取。不知道我可不可以照搬。不过斑马鱼小，像手指头那么大。 1：斑马鱼、2：液氮冻死、3：剪头、4：缓冲液buffer研磨（冰上进行）、5：离心1400rpm、6：取沉淀、7：重复345、8：把沉淀放到裂解液（bufferB)、9：研磨、10：100000g离心、11：取上清12：100%TCA150ul混匀13：12000rpm 20min 弃上清14：加500ul丙酮15:37℃烘箱五分钟16：加入60ul Loading buffer 煮沸5min。。。 谢谢你的建议，我查了硫氰酸胍－酸性酚－氯仿法。网上有完整步骤。不过那个dT纤维柱得自己买，肯定要很多银子吧。谢谢你一直以来的帮助。  |
3楼2012-07-15 16:08:08
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验，很热心哦 2012-07-16 13:42:10
fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:08
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-11 11:10:08
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给你个建议 少弄点材料 新手总是认为材料越多越好 头盖骨揭开就可以看到白色豆腐状的脑 鱼的脑分大 间 中 小 延五部脑 建议先看下鱼类解剖的资料 要是一起弄的话 体积会很大 一般提RNA 只要绿豆一半大的材料加1ml trizol就行了 材料：trizol太多了的话 也会因裂解不完全引起降解的 扩基因的话 杀一条鱼即可 因为同是做鱼的 所以还是回一下 呵呵 |
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