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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？

如题~~~
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1楼 2012-07-11 21:11:27
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feixiang1209

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助, 我原来是这样的，但是感觉这样太耗时间了… 2012-07-12 11:19:45
最好是跑下电泳，毕竟会切下来一些小片段嘛，胶回收的话是只回收的目的条带，应该效果更好一些。反正我们从来没试过直接纯化。
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2楼2012-07-12 09:17:21
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助, 那酶切产物呢？ 2012-07-12 11:21:22
天根胶回收试剂盒是可以直接用来作为PCR混合液回收的
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3楼2012-07-12 09:34:43
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 酶切后大概短片段有七八个bp。应该没有问题吧？另外，可以除去质粒酶切后的短片段吗？ 2012-07-12 11:24:27
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-20 13:50:36
要看你PCR产物酶切后剩余片段的大小，如果除了目标片段外，剩下的都小于50bp，可以直接用Omega的cycle-pure试剂盒直接回收。如果剩余的较大，最好是做胶回收，这样可以避免后续出现很多假阳性。
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4楼2012-07-12 10:18:20
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chlorella409

木虫 (正式写手)

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酶切产物它没说，但是个人觉得应该不可以，因为酶切之后肯定至少有两种大小片段在混合液里，浓度还差不多，直接回收肯定会影响效率
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5楼2012-07-12 13:40:02
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ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-12 13:58:06
liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 那么我多克隆位点双酶切后的小片段也应该可以直接纯化吧？ 2012-07-12 16:34:02
PCR产物酶切克隆被切下来的片段一般是限制性酶切位点和保护碱基的序列，一般<10bp；可以直接用PCR Cleanup或者切胶回收试剂盒的柱子纯化。
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6楼2012-07-12 13:42:42
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-07-12 13:40:02
酶切产物它没说，但是个人觉得应该不可以，因为酶切之后肯定至少有两种大小片段在混合液里，浓度还差不多，直接回收肯定会影响效率

哦~~我说的是质粒多克隆位点双酶切后的小片段，大概有10几个bp的样子吧~~~
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7楼2012-07-12 16:34:58
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢交流~~~ 2012-07-12 21:09:48
天根和Omega的试剂盒都是可以的，不过如果不赶时间的话，还是做一下胶回收吧，毕竟胶回收可以除去一些杂带，避免以后有大批量的假阳性。
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8楼2012-07-12 16:49:32
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个我就不清楚了，没做过呢
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9楼2012-07-12 21:24:30
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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liuyu_sdili: 金币+2, 谢谢，准备试试看~~~ 2012-07-13 17:53:42
这个可以的呀，我做的连接都是这样过来的，关键是你的pcr产物必须是只有两边的酶切位点，切下来的片段很小就可以忽略。
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coasttocoast。
10楼2012-07-12 22:08:20
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