| 查看: 797 | 回复: 0 | |||
[求助]
细胞SDS跑的时候为什么下边就没有条带了（Tricine-SDS-PAGE）
|
|
我的蛋白大约12KD，我先做的是普通的SDS-PAGE（甚至是18%的分离胶），没有跑出来。后边跑的是 Tricine-SDS-PAGE，据说能很好的分离20KD以下的蛋白，胶的浓度从10%到16%都跑过，可是还是不理想，20KD以下没有清晰的条带，有做过Tricine-SDS-PAGE的或者SDS高手能给点建议，不胜感激。 步骤： 细胞裂解：细胞裂解液加的是全细胞裂解液，冰上操作，六孔板每孔加入100微升的裂解液，静置30min， 细胞组分蛋白加入上样缓冲液煮沸10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清进行蛋白电泳。 1.正极缓冲液anode buffer（1X）： 0.2M Tris(pH 8.9):12.114g加H20定容至500ml, 4℃保存。 2.负极缓冲液 cathode buffer (1X): 6.057gTris+8.96gTricine+0.5g SDS 加H20定容至500ml,不用调pH， 4℃保存。 3. 凝胶缓冲液 gel buffer(G-B, 3X): 36.342gTris+0.3gSDS加H20定容至100ml H20,HCL调pH=8.45,过滤4℃保存。 4. AB-3 储存液(49.5%T,3%Cmixture): 24g丙烯酰胺+0.75g甲叉双丙烯酰胺 加H20定容至50ml,过滤4℃保存。 5．AB-6储存液(49.5%T,6%Cmixture): 23.25g丙烯酰胺+1.5g甲叉双丙烯酰胺 加H20定容至50ml,过滤4℃保存。 用的是大板胶，90V要跑10h才能跑完，冰上运行。  |
回复此楼» 猜你喜欢
学科评审组评审是指会评吗？
已经有3人回复
-
面上合作单位盖章
已经有8人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有15人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有12人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有7人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
SDS-PAGE跑成这样是什么原因？
已经有10人回复
- sds-page电泳时marker少跑出一条带是怎么回事？
已经有6人回复
- SDS-Page电泳没有条带，都是黑黑的一片，请教原因
已经有9人回复
- SDS-PAGE什么条带都没有
已经有10人回复
- sds page 跑不出条带
已经有11人回复
- SDS-PAGE后面几条带弥散求助
已经有15人回复
- SDS-PAGE跑出来的条带不清晰
已经有10人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳条带问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】为什么我的sds-page全细胞总跑成这样，影响看结果，请指点。
已经有16人回复
- 【求助/交流】大家来看看我的SDS-PAGE图，为什么有些主带分成了好几条小带???
已经有16人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
20