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铜虫 (初入文坛)

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[求助] 细胞SDS跑的时候为什么下边就没有条带了（Tricine-SDS-PAGE）

我的蛋白大约12KD，我先做的是普通的SDS-PAGE（甚至是18%的分离胶），没有跑出来。后边跑的是
Tricine-SDS-PAGE，据说能很好的分离20KD以下的蛋白，胶的浓度从10%到16%都跑过，可是还是不理想，20KD以下没有清晰的条带，有做过Tricine-SDS-PAGE的或者SDS高手能给点建议，不胜感激。
步骤：
细胞裂解：细胞裂解液加的是全细胞裂解液，冰上操作，六孔板每孔加入100微升的裂解液，静置30min，
细胞组分蛋白加入上样缓冲液煮沸10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清进行蛋白电泳。
1.正极缓冲液anode buffer（1X）：
　　0.2M Tris(pH 8.9):12.114g加H20定容至500ml, 4℃保存。
2.负极缓冲液 cathode buffer (1X):
6.057gTris+8.96gTricine+0.5g SDS 加H20定容至500ml,不用调pH， 4℃保存。
3. 凝胶缓冲液 gel buffer(G-B, 3X):
　　36.342gTris+0.3gSDS加H20定容至100ml H20,HCL调pH=8.45,过滤4℃保存。
4. AB-3 储存液(49.5%T,3%Cmixture):
　　24g丙烯酰胺+0.75g甲叉双丙烯酰胺加H20定容至50ml,过滤4℃保存。
5．AB-6储存液(49.5%T,6%Cmixture):
　　23.25g丙烯酰胺+1.5g甲叉双丙烯酰胺加H20定容至50ml,过滤4℃保存。
用的是大板胶，90V要跑10h才能跑完，冰上运行。

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