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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做western 如何提蛋白可同时获得膜蛋白和胞内蛋白
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AMU_801

银虫 (小有名气)

[求助] 做western 如何提蛋白可同时获得膜蛋白和胞内蛋白

菜鸟又来求助了 =w=

在下要做western 需要一个膜上的受体蛋白和胞内的数种蛋白。
之前做过一次 ①把细胞泡在胰酶里时间稍微长了点 ②用了强裂解液。结果只得到了胞内蛋白，膜上受体没出条带

看到有专门提膜蛋白的教程 可是我同时还想要胞内的蛋白 并且还需要相应的磷酸化蛋白

觉得肯定有做过的大虾 指点一下吧
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【空】
1楼 2012-07-09 11:24:58
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xhjggl

木虫 (正式写手)
silicare: 屏蔽内容, 违规存档 2012-07-12 09:31:52
本帖内容被屏蔽
2楼2012-07-09 13:02:10
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jhcq20110122

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
碧云天的试剂盒挺好的，我们实验室用的比较多
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3楼2012-07-09 16:21:03
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晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是用碧云天的试剂盒
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人有绝交，才有至交！
4楼2012-07-09 18:18:49
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zdy99990

银虫 (小有名气)
学习中
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改变从相信开始~~乎乎
5楼2012-07-09 20:58:43
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shijunyu0618

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
AMU_801: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢各位的回复了 问了几个师姐得到答案差不多也是这样 试剂盒来不及买 这一批先提取总蛋白吧 如果效果不好 再申请买试剂盒 2012-07-10 16:04:29
一般的膜蛋白，可以使用总蛋白提取。多次跨膜蛋白，最好使用专门的膜蛋白提取试剂。
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6楼2012-07-10 15:17:35
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lingpiao
kit
7楼2012-07-14 08:59:35
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jl860822

金虫 (正式写手)
一次提取想得到这么多不同种类的蛋白，不太可能，你还是老老实实的一次次的来吧
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8楼2012-07-17 21:11:09
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hellolin

金虫 (小有名气)
楼主你好，我最近也在做一个膜蛋白的western，是抽提总蛋白做的，但是总是做不出来。不知道你现在结果怎么样了，用了试剂盒效果是不是会好点
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scienceguy
9楼2012-12-27 15:18:49
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AMU_801

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-27 15:18:49
楼主你好，我最近也在做一个膜蛋白的western，是抽提总蛋白做的，但是总是做不出来。不知道你现在结果怎么样了，用了试剂盒效果是不是会好点

你好 我买了碧某天的试剂盒 不过如果是细胞 要求细胞量很大 当时没找到匀浆机 用液氮反复冻融效果也不太好  我杂胞浆蛋白一般用15-20ug  把量提到60--100ug时 膜蛋白也能看到
后来觉得我这个系统里 膜蛋白也不是很重要 就暂时放下了``` 希望你找到更好的方法吧
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【空】
10楼2012-12-29 22:19:12
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