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小米椒k铁虫 (初入文坛)
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[求助]
紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
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| 大家好，我才开始做总蛋白SDS-PAGE，现在预实验已经做好了，但是不太清楚该怎么去上样来说明我论文中要表达的问题，我做果蔬保鲜，有对照和处理组2个试验组，贮藏期为30d，我想通过总蛋白电泳来看2个试验组组内和组间在整个贮藏期间的总蛋白变化，问了实验室其他跑蛋白的同学，他们都说上样前要调蛋白浓度，使每个样品上样的总蛋白含量（μg数）达到一致，是这样的吗？我做的果蔬中总蛋白含量在贮藏期和2个试验组间是有显著差异的，我想的是称取10g样品，提取处理后直接上样跑蛋白，就不调他们的蛋白含量了，因为我想如果样品中蛋白要是多的话跑出来自然条带就亮，这样想对吗？急求大家的帮助，在做蛋白上实在了解的少呀。 |
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dshlove
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫 2012-07-02 14:03:56
小米椒k: 金币+35, ★★★★★最佳答案, 清楚明了 2012-07-03 15:20:34
小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫 2012-07-02 14:03:56
小米椒k: 金币+35, ★★★★★最佳答案, 清楚明了 2012-07-03 15:20:34
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胶跑出来的只是做个直观展示。针对你说的，你是想看你的样品中蛋白量，或者某一个蛋白随时间变化而变化的趋势对不对？ 如果是这样的话，你就规定每次点样的体积（这个体积你去试，因为体积大了，蛋白量多，胶可能就难看了）然后随天数变化的样品也点一样的体积。 针对你师兄说的，“但是我问实验室做蛋白的师兄说要精确定量呢，好像说是如果不把2个样品的蛋白含量调的一致，就没有一个基准，无法说明条带颜色变化的情况。。。请问是这样么?”，这一点，你不是有实验组和对照组么，他的意思是要你每天取样的时候（假如你每天都取样）要取的实验组和对照组跑胶的时候，同一批次的上样蛋白量是要一致的。这样才能做比较。 懂了没？ |
7楼2012-07-02 13:07:01
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小米椒k2楼2012-07-02 08:58:23
小米椒k
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3楼2012-07-02 10:55:07
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