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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
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小米椒k

铁虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？

大家好，我才开始做总蛋白SDS-PAGE，现在预实验已经做好了，但是不太清楚该怎么去上样来说明我论文中要表达的问题，我做果蔬保鲜，有对照和处理组2个试验组，贮藏期为30d，我想通过总蛋白电泳来看2个试验组组内和组间在整个贮藏期间的总蛋白变化，问了实验室其他跑蛋白的同学，他们都说上样前要调蛋白浓度，使每个样品上样的总蛋白含量（μg数）达到一致，是这样的吗？我做的果蔬中总蛋白含量在贮藏期和2个试验组间是有显著差异的，我想的是称取10g样品，提取处理后直接上样跑蛋白，就不调他们的蛋白含量了，因为我想如果样品中蛋白要是多的话跑出来自然条带就亮，这样想对吗？急求大家的帮助，在做蛋白上实在了解的少呀。
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1楼 2012-07-01 16:30:49
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小米椒k

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-02 11:02:49
基本是这样的，就比如说，你一个蛋白样里面有5ug的蛋白另一个蛋白样有10ug的蛋白，后面的条带肯定要粗一点，你就不能说后面蛋白比前面的好还是坏，只有在同等浓度，同等上样量的情况下比较，不然不就是没意义了么。...

我每次处理样品的方法都一样，上样体积也给它规定一样，那样品的蛋白浓度高的话自然条带就粗，而不是因为我故意给它上样比对照组多。比如在贮藏第10 d，处理组样品蛋白含量本来就比对照高，且100kd大小的蛋白也比处理组多，但是我如果把处理组蛋白浓度稀释到和对照组一样的话，那100kd的蛋白也少了啊，这样的话我可能对照组和处理组之间这100kd大小的蛋白含量就没有差异了呢......不好意思，我现在脑子比较纠结，也不知道想对了没有。
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5楼2012-07-02 12:47:50
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那个调蛋白含量的目的是使你跑胶的条带均一。
其实你只要大致知道你的蛋白含量具体是多少，在点样的时候调整点样的量就行了。
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小米椒k
2楼2012-07-02 08:58:23
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小米椒k

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-02 08:58:23
那个调蛋白含量的目的是使你跑胶的条带均一。
其实你只要大致知道你的蛋白含量具体是多少，在点样的时候调整点样的量就行了。

但是我问实验室做蛋白的师兄说要精确定量呢，好像说是如果不把2个样品的蛋白含量调的一致，就没有一个基准，无法说明条带颜色变化的情况。。。请问是这样么?
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3楼2012-07-02 10:55:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-02 14:03:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小米椒k at 2012-07-02 10:55:07
但是我问实验室做蛋白的师兄说要精确定量呢，好像说是如果不把2个样品的蛋白含量调的一致，就没有一个基准，无法说明条带颜色变化的情况。。。请问是这样么?...

基本是这样的，就比如说，你一个蛋白样里面有5ug的蛋白另一个蛋白样有10ug的蛋白，后面的条带肯定要粗一点，你就不能说后面蛋白比前面的好还是坏，只有在同等浓度，同等上样量的情况下比较，不然不就是没意义了么。
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4楼2012-07-02 11:02:49
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