应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白不纯，如图，大家帮忙分析一下
231/1返回列表
查看: 2556  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 蛋白不纯，如图，大家帮忙分析一下

蛋白几个月之前还很纯，就一条主带和一点点的杂带。但慢慢的好像菌种退化了，表达的蛋白如图，上边有好多类似多聚的东西，但跑胶应该变性了才对啊。我用的是rosetta表达，蛋白不稳定很容易沉淀，但过了离子交换后加DTT沉淀情况明显减轻，大家帮忙分析一下啊，这东西真蛋疼。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-06-30 16:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kwkw

木虫 (著名写手)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗？
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-01 08:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

strive123123

禁虫 (文坛精英)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 啥意思？ 2012-07-03 07:45:58
本帖内容被屏蔽
3楼2012-07-01 10:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么菌种？什么质粒转化的？
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-01 11:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

675250244

银虫 (小有名气)
★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-07-03 07:46:14
蛋白marker贴出来看看，我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体，跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-01 12:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 八头小猪 at 2012-07-01 11:11:02
你用的是什么菌种？什么质粒转化的？

Ecoli  ROSETTA的~ 28a的质粒
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-01 14:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kwkw at 2012-07-01 08:24:24
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗？

没有影响，我觉得可能是DTT部分打开了蛋白分子间的二硫键，一定程度稳定了蛋白，这样解释可能吗
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-01 14:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 675250244 at 2012-07-01 12:12:17
蛋白marker贴出来看看，我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体，跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的

我觉得应该也煮开了啊~最下面的是我的目的条带，大概26KD 中间那条大概55KD, 上面的几个就难说了。。。。。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-01 14:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingying1588

木虫之王 (文学泰斗)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
没有影响。
回复此楼
9楼2012-07-01 21:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+3, 可以多多交流 2012-07-03 07:46:42
引用回帖:
5楼: Originally posted by 675250244 at 2012-07-01 12:12:17
蛋白marker贴出来看看，我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体，跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的

确定电泳加了buffer经高温煮过，就不能形成多聚体了么？
因为我有一个蛋白，跑电泳的时候老是有二聚体在，我做质谱检测就是我的目的蛋白
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-02 01:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 股交流 2012-07-03 15:21:17
lz，下面量最多的应该是你的目的蛋白吧，我感觉中间那个应该是你蛋白的二聚体或者其他具体，具体要看分子量
因为你点样太多，所以难免会有一些杂带，你可以尝试减少上样量，应该跑出来的效果就会好一些，你提取的蛋白主要是拿来做什么的呢？
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-02 01:58:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-07-02 01:58:55
lz，下面量最多的应该是你的目的蛋白吧，我感觉中间那个应该是你蛋白的二聚体或者其他具体，具体要看分子量
因为你点样太多，所以难免会有一些杂带，你可以尝试减少上样量，应该跑出来的效果就会好一些，你提取的蛋 ...

做晶体，所以希望纯度高些，变性胶二聚应该解开了啊
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-02 04:44:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kwkw at 2012-07-01 08:24:24
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗？

少量dTT不会
回复此楼
13楼2012-07-02 09:01:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-01 14:23:20
没有影响，我觉得可能是DTT部分打开了蛋白分子间的二硫键，一定程度稳定了蛋白，这样解释可能吗...

有这种可能
回复此楼
14楼2012-07-02 09:02:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那可能是时间长了，质粒部分丢失
赞一下 回复此楼
15楼2012-07-02 23:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-02 04:44:56
做晶体，所以希望纯度高些，变性胶二聚应该解开了啊...


同道中人
恩，理论上是应该解开了，但是事实上确实就是二聚体，我做质谱检测过的
赞一下 回复此楼
16楼2012-07-03 00:50:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-02 04:44:56
做晶体，所以希望纯度高些，变性胶二聚应该解开了啊...

我不知道怎么发图，我就想给你看一下，我的电泳图是什么样子的，差不多跟你是一样的，目的蛋白特别的浓，上面有一条杂带，就是二聚体
赞一下 回复此楼
17楼2012-07-03 00:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-07-03 00:50:23

同道中人
恩，理论上是应该解开了，但是事实上确实就是二聚体，我做质谱检测过的...

有办法解开么这个？？
赞一下 回复此楼
18楼2012-07-03 07:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kukusnoopy

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-03 07:39:12
有办法解开么这个？？...

可以尝试煮的时间长一些，如果还是有聚体就用更强的还原剂TECP。
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-03 10:36:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianshengguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得可能是多聚体，加DTT还原不是就好多了嘛。
赞一下 回复此楼
20楼2012-07-03 22:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by kukusnoopy at 2012-07-03 10:36:35
可以尝试煮的时间长一些，如果还是有聚体就用更强的还原剂TECP。...

额。。。。我的意思是缓冲液条件下这个蛋白过分子筛好像有个小的多聚峰，好像是蛋白慢慢在聚啊？能不能减少这种情况呢
赞一下 回复此楼
21楼2012-07-04 18:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
好像就是啊，怎么回事呢
赞一下 回复此楼
22楼2012-07-05 09:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑笑2697

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
若用镍柱纯化，是不是你的蛋白序列中存在类似组氨酸标签的结构，因此纯化的时候纯化下来了~交流一下！
赞一下 回复此楼
23楼2012-09-19 11:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
231/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +8 恶法大二的气味� 2026-04-05 11/550 2026-04-11 11:28 by 紫曦紫棋
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 材料工程085601，270求调剂 +30 @ASDF1234 2026-04-08 32/1600 2026-04-11 10:30 by Delta2012
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 求调剂288 +6 ioodiiij 2026-04-10 8/400 2026-04-10 21:07 by zhouxiaoyu
[考研] 307求调剂 +8 tzq94092 2026-04-10 8/400 2026-04-10 17:33 by 286640313
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +22 土豆er? 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 10:58 by 高维春
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +16 路痴小琪 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:08 by kangsm
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
[考研] 071000生物学调剂 +7 拉提桃 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:55 by 52305043001
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸！ 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭