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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] 蛋白不纯,如图,大家帮忙分析一下

蛋白几个月之前还很纯,就一条主带和一点点的杂带。但慢慢的好像菌种退化了,表达的蛋白如图,上边有好多类似多聚的东西,但跑胶应该变性了才对啊。我用的是rosetta表达,蛋白不稳定很容易沉淀,但过了离子交换后加DTT沉淀情况明显减轻,大家帮忙分析一下啊,这东西真蛋疼。。。。。
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xiangquanju

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-02 04:44:56
做晶体,所以希望纯度高些,变性胶二聚应该解开了啊...


同道中人
恩,理论上是应该解开了,但是事实上确实就是二聚体,我做质谱检测过的
16楼2012-07-03 00:50:23
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kwkw

木虫 (著名写手)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗?
2楼2012-07-01 08:24:24
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么菌种?什么质粒转化的?
4楼2012-07-01 11:11:02
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675250244

银虫 (小有名气)


★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-07-03 07:46:14
蛋白marker贴出来看看,我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体,跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的
5楼2012-07-01 12:12:17
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