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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白不纯，如图，大家帮忙分析一下
汕头大学海洋科学接受调剂
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 蛋白不纯，如图，大家帮忙分析一下

蛋白几个月之前还很纯，就一条主带和一点点的杂带。但慢慢的好像菌种退化了，表达的蛋白如图，上边有好多类似多聚的东西，但跑胶应该变性了才对啊。我用的是rosetta表达，蛋白不稳定很容易沉淀，但过了离子交换后加DTT沉淀情况明显减轻，大家帮忙分析一下啊，这东西真蛋疼。。。。。
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1楼 2012-06-30 16:20:43
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-07-02 01:58:55
lz，下面量最多的应该是你的目的蛋白吧，我感觉中间那个应该是你蛋白的二聚体或者其他具体，具体要看分子量
因为你点样太多，所以难免会有一些杂带，你可以尝试减少上样量，应该跑出来的效果就会好一些，你提取的蛋 ...

做晶体，所以希望纯度高些，变性胶二聚应该解开了啊
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12楼2012-07-02 04:44:56
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kwkw

木虫 (著名写手)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗？
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2楼2012-07-01 08:24:24
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么菌种？什么质粒转化的？
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4楼2012-07-01 11:11:02
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675250244

银虫 (小有名气)
★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-07-03 07:46:14
蛋白marker贴出来看看，我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体，跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的
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5楼2012-07-01 12:12:17
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