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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] 蛋白不纯,如图,大家帮忙分析一下

蛋白几个月之前还很纯,就一条主带和一点点的杂带。但慢慢的好像菌种退化了,表达的蛋白如图,上边有好多类似多聚的东西,但跑胶应该变性了才对啊。我用的是rosetta表达,蛋白不稳定很容易沉淀,但过了离子交换后加DTT沉淀情况明显减轻,大家帮忙分析一下啊,这东西真蛋疼。。。。。
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dshlove

木虫 (正式写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-01 14:23:20
没有影响,我觉得可能是DTT部分打开了蛋白分子间的二硫键,一定程度稳定了蛋白,这样解释可能吗...

有这种可能
14楼2012-07-02 09:02:14
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查看全部 23 个回答

kwkw

木虫 (著名写手)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你加了DTT不影响蛋白质的活性吗?
2楼2012-07-01 08:24:24
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)



loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么菌种?什么质粒转化的?
4楼2012-07-01 11:11:02
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675250244

银虫 (小有名气)


★ ★
loveskyzhou(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-07-03 07:46:14
蛋白marker贴出来看看,我认为上面 的杂带不是目的蛋白的多聚体,跑电泳时煮过而且上样buffer中加了巯基乙醇是不可能形成多聚体的
5楼2012-07-01 12:12:17
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