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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖电泳成火箭状，整块模糊？？？？急
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ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖电泳成火箭状，整块模糊？？？？急

大家好：
       我最近做的PCR，并将其跑琼脂糖凝胶，都没有明显的但一条带，而是拖尾很严重，成火箭状是什么情况？我用的模板是PCR产物经纯化回收后的样品，条带很单一，而且Marker很清晰。请高手相助！！！！

琼脂糖凝胶电泳。Marker清晰，但样品糊状
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1楼 2012-06-27 10:03:07
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ss000qq

金虫 (正式写手)
2楼2012-06-27 10:03:20
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杜保群

金虫 (小有名气)

专业微流控

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:45:21
ss000qq: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-06-28 12:36:29
你没有做阴性对照 阳性对照  也没有说明marker的大小 也没有说你的目的片段是多大 引物等情况
从图上看 marker跑的正常  说明胶没有问题
弥散 说明有降解和非特异性扩增
条带颜色也不正常 可能是加进去的时候温度有些高或没混匀所致
呵呵  希望对你有所帮助
赞一下 回复此楼
需要微流控相关的都可以找我 杜15911012041
3楼2012-06-27 11:03:44
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ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 杜保群 at 2012-06-27 11:03:44
你没有做阴性对照 阳性对照  也没有说明marker的大小 也没有说你的目的片段是多大 引物等情况
从图上看 marker跑的正常  说明胶没有问题
弥散 说明有降解和非特异性扩增
条带颜色也不正常 可能是加进去的时候温 ...

谢谢
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4楼2012-06-27 12:57:21
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ss000qq

金虫 (正式写手)
顶一下
5楼2012-06-28 12:36:03
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ss000qq: 金币+1 2012-06-29 09:00:03
有降解和非特异性扩增。更换PCR体系
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-28 14:09:49
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ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sk_yb at 2012-06-28 14:09:49
有降解和非特异性扩增。更换PCR体系

谢谢，我现在已经做出来，应该是我的模板GC比太高，导致变性时裂解不完全。
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7楼2012-06-29 08:59:56
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by ss000qq at 2012-06-29 08:59:56
谢谢，我现在已经做出来，应该是我的模板GC比太高，导致变性时裂解不完全。...

模板GC含量高，你是如何更换体系做出来的，用GC Buffer？加甘油？甜菜碱？
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
8楼2012-06-29 11:14:13
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ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Marado at 2012-06-29 11:14:13
模板GC含量高，你是如何更换体系做出来的，用GC Buffer？加甘油？甜菜碱？...

我是添加了GC Buffer
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9楼2012-06-29 12:43:40
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爱莫若月

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
想问问你用的是EB？还是goldview啊？
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10楼2012-06-29 19:29:33
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