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ss000qq

金虫 (正式写手)


[求助] 琼脂糖电泳成火箭状,整块模糊????急

大家好:
       我最近做的PCR,并将其跑琼脂糖凝胶,都没有明显的但一条带,而是拖尾很严重,成火箭状是什么情况?我用的模板是PCR产物经纯化回收后的样品,条带很单一,而且Marker很清晰。请高手相助!!!!

琼脂糖凝胶电泳。Marker清晰,但样品糊状
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ss000qq: 金币+1 2012-06-29 09:00:03
有降解和非特异性扩增。更换PCR体系
6楼2012-06-28 14:09:49
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杜保群

金虫 (小有名气)

专业微流控

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:45:21
ss000qq: 金币+1, 有帮助, 谢谢 2012-06-28 12:36:29
你没有做阴性对照 阳性对照  也没有说明marker的大小 也没有说你的目的片段是多大 引物等情况
从图上看 marker跑的正常  说明胶没有问题
弥散 说明有降解和非特异性扩增
条带颜色也不正常 可能是加进去的时候温度有些高或没混匀所致
呵呵  希望对你有所帮助
需要微流控相关的都可以找我 杜15911012041
3楼2012-06-27 11:03:44
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ss000qq

金虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 杜保群 at 2012-06-27 11:03:44
你没有做阴性对照 阳性对照  也没有说明marker的大小 也没有说你的目的片段是多大 引物等情况
从图上看 marker跑的正常  说明胶没有问题
弥散 说明有降解和非特异性扩增
条带颜色也不正常 可能是加进去的时候温 ...

谢谢
4楼2012-06-27 12:57:21
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ss000qq

金虫 (正式写手)


引用回帖:
6楼: Originally posted by sk_yb at 2012-06-28 14:09:49
有降解和非特异性扩增。更换PCR体系

谢谢,我现在已经做出来,应该是我的模板GC比太高,导致变性时裂解不完全。
7楼2012-06-29 08:59:56
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