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[求助]
超声破碎细胞
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最近在侧细胞内SOD值 需要破碎细胞 想问下 说明书上说破碎15分钟 40-60w 但是没有说具体工作几秒停几秒 还有我要测18个样 15分钟这个时间也太长了 对于先超声好的样品里的酶是不是有影响呀？ 想问下 又没有做过这方面的 提供下经验 谢谢 |
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 肿瘤研究 | 纳米生物类 |
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2楼2012-06-25 15:57:07
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10楼2012-06-26 15:02:29
【答案】应助回帖
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破碎，本人还是有点小经验的，与你分享下吧！（我这个适合于大样品的处理，小样品的没试过） a.超声破碎整个过程需要在冰水混合物的冰浴上进行！水不要多也不要太少！ b.破碎前，加少量溶菌酶和核酸酶。溶菌酶可以减少破菌时间，核酸酶可以水解核酸。还可以加点还原剂，如果你的半胱氨酸较多的话；也可以加点蛋白酶抑制剂！ c.超生破碎参数要设置恰当，一般间隙需要是超声的2倍，建议选择6s间隙，和3s破碎！如果样品量少于100ml， 建议500W超声20min，大概就行了！溶液就澄清了，不会那么粘！！！如果浑浊，但不粘，可能是包涵体！ d.破碎时，温度要控制好！过10min，搅拌一下样品，不要使样液温度很高，碰一下烧杯壁就能感觉到！如果温度高，那就先暂停一下，等温度降低，并且确保在冰浴中！或者改变超声参数，改为10s间隙，5s破碎，全程20~25min！ f.破碎完的蛋白离心之后要立即纯化，因为破碎后，样液中可能有许多蛋白酶，长时间放置会降解蛋白！ |
14楼2013-05-10 22:54:47
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