| 查看: 1551 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于WB的问题
|
||
|
本人做的两个月WB 最后都没有想要的结果。明天打算从跑一次电泳 完整的再做一次看看。（本人大二，知识储备不足，谅解....） 有几个问题想问大家： 1.提取蛋白后（一共提了3份：①、②是转染我要的质粒后的细胞裂解蛋白，浓度分别是 3.3和3.8，③是未转染直接提取的阴性对照，浓度很高，是5.2）........请问我上样时 应该加多少微升，导师说是上15微升 那是3个样品保证质量相同还是体积相同？ 2.蛋白提取了300微升 每次取100微升加20微升的β-巯基乙醇，沸水中煮8分钟，请问β-巯基乙醇作用是什么 ，为什么要沸水煮。。。还有就是我每次取蛋白取完以后又把剩下的放进去 然后下次又取。。。这样反复冻融对蛋白有没有影响？ 做了两个月了。。一开始是空白 啥都没有 后来是非特异条带特别亮 不管是阳性还是阴性，就是没有要的目的条带。感觉砖模和跑胶都不错。昨天换了抗体 说明书上说的是1:3000- 1:8000都行 我用1:2000做了上周转上的PVDF模，结果今天看了结果还是白版。。。无解了都…………只好今晚在从新跑胶………………   |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有16人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有13人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有15人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有12人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有14人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有12人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有11人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于多克隆抗体和单克隆抗体的问题
已经有4人回复
- WB三明治--滤纸大小问题
已经有18人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- WB实验，胶片问题
已经有10人回复
- WB抗体孵育问题！
已经有7人回复
- 关于cyt C问题
已经有12人回复
- WB定量问题
已经有13人回复
- 关于英国签证调查
已经有27人回复
- 关于一抗二抗杂交
已经有11人回复
- 【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于Westrn blot
已经有11人回复
- 【求助/交流】求助：关于基因敲除后对下游基因的影响相关问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
已经有11人回复
peterozmo
银虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 248.9
- 散金: 100
- 帖子: 89
- 在线: 21.6小时
- 虫号: 1241548
- 注册: 2011-03-22
- 性别: GG
- 专业: 心脑血管药物药理
4楼2012-06-20 23:13:13
2楼2012-06-20 22:12:09
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
3楼2012-06-20 22:45:11
