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necilyx

金虫 (正式写手)

[求助] Real time PCR的扩增片段为什么要在150-250之间,为什么不易过长?

如题,是为了有一个比较均一且高效的扩增效率吗?具体是什么原因?到并且如果扩增片段长度较长(300~500左右),会怎么样?
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聪明才智要为意外做准备~~
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
necilyx: 金币+1, 有帮助 2012-06-18 12:22:47
necilyx: 金币+1, 有帮助 2012-06-18 12:23:17
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-19 13:40:45
有这个限制吗?
我以前做过定量的,但没有注意到有这个限制
搜索了一下
觉得可能原因是片段太长扩增效率可能存在降低的现象,片段小一点,可以使各自的扩增效率接近1(实际上往往在1左右,有时比1要高),
5楼2012-06-18 08:51:22
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
necilyx: 金币+2, 有帮助 2012-06-19 10:56:50
小丹木木: 金币+2, 辛苦 2012-06-19 13:41:12
扩增产物过长,有可能在PCR延伸的时候产物不能完全形成双链就进入了下一个循环周期,导致定量不准确。
11楼2012-06-18 21:44:43
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普通回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

好像是因为荧光染料的原因吧
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
2楼2012-06-17 18:42:55
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
necilyx: 金币+1, 有帮助 2012-06-18 12:22:32
只是建议在80~150左右,特异性会比较好。实际上最大到300也能做。
哦也
3楼2012-06-17 23:52:40
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
necilyx: 金币+1, 有帮助 2012-06-18 12:22:39
扩增片段长度有点长啊,不好控制。
蓝精灵
4楼2012-06-18 06:57:48
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-17 23:52:40
只是建议在80~150左右,特异性会比较好。实际上最大到300也能做。

特异性好像是与引物有关吧,谢谢~~
聪明才智要为意外做准备~~
6楼2012-06-18 12:25:01
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-17 23:52:40
只是建议在80~150左右,特异性会比较好。实际上最大到300也能做。

特异性好像是与引物有关吧,谢谢~~
聪明才智要为意外做准备~~
7楼2012-06-18 12:25:07
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mlanqiang at 2012-06-18 06:57:48
扩增片段长度有点长啊,不好控制。

您说的不好控制具体是什么呢?
聪明才智要为意外做准备~~
8楼2012-06-18 12:25:57
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jasonwyb123 at 2012-06-18 08:51:22
有这个限制吗?
我以前做过定量的,但没有注意到有这个限制
搜索了一下
觉得可能原因是片段太长扩增效率可能存在降低的现象,片段小一点,可以使各自的扩增效率接近1(实际上往往在1左右,有时比1要高),

我以前做也没注意有这个限制,这两天被一个博士后严格 的教育了一番,呵呵~~我感觉可能也是因为扩增效率的问题~~谢谢
聪明才智要为意外做准备~~
9楼2012-06-18 12:27:09
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我的将近700也做了,效果也很好
10楼2012-06-18 12:44:09
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