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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Real time PCR的扩增片段为什么要在150-250之间，为什么不易过长？
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necilyx

金虫 (正式写手)

[求助] Real time PCR的扩增片段为什么要在150-250之间，为什么不易过长？

如题，是为了有一个比较均一且高效的扩增效率吗？具体是什么原因？到并且如果扩增片段长度较长（300~500左右），会怎么样？
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聪明才智要为意外做准备~~
1楼 2012-06-17 18:25:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
necilyx: 金币+1, ★有帮助 2012-06-18 12:22:47
necilyx: 金币+1, ★有帮助 2012-06-18 12:23:17
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-19 13:40:45
有这个限制吗？
我以前做过定量的，但没有注意到有这个限制
搜索了一下
觉得可能原因是片段太长扩增效率可能存在降低的现象，片段小一点，可以使各自的扩增效率接近1（实际上往往在1左右，有时比1要高），
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5楼2012-06-18 08:51:22
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
necilyx: 金币+2, ★有帮助 2012-06-19 10:56:50
小丹木木: 金币+2, 辛苦 2012-06-19 13:41:12
扩增产物过长，有可能在PCR延伸的时候产物不能完全形成双链就进入了下一个循环周期，导致定量不准确。
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11楼2012-06-18 21:44:43
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普通回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)
好像是因为荧光染料的原因吧
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
2楼2012-06-17 18:42:55
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
necilyx: 金币+1, ★有帮助 2012-06-18 12:22:32
只是建议在80~150左右，特异性会比较好。实际上最大到300也能做。
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哦也
3楼2012-06-17 23:52:40
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
necilyx: 金币+1, ★有帮助 2012-06-18 12:22:39
扩增片段长度有点长啊，不好控制。
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蓝精灵
4楼2012-06-18 06:57:48
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necilyx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-17 23:52:40
只是建议在80~150左右，特异性会比较好。实际上最大到300也能做。

特异性好像是与引物有关吧，谢谢~~
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聪明才智要为意外做准备~~
6楼2012-06-18 12:25:01
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necilyx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-17 23:52:40
只是建议在80~150左右，特异性会比较好。实际上最大到300也能做。

特异性好像是与引物有关吧，谢谢~~
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聪明才智要为意外做准备~~
7楼2012-06-18 12:25:07
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necilyx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mlanqiang at 2012-06-18 06:57:48
扩增片段长度有点长啊，不好控制。

您说的不好控制具体是什么呢？
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聪明才智要为意外做准备~~
8楼2012-06-18 12:25:57
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necilyx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jasonwyb123 at 2012-06-18 08:51:22
有这个限制吗？
我以前做过定量的，但没有注意到有这个限制
搜索了一下
觉得可能原因是片段太长扩增效率可能存在降低的现象，片段小一点，可以使各自的扩增效率接近1（实际上往往在1左右，有时比1要高），

我以前做也没注意有这个限制，这两天被一个博士后严格 的教育了一番，呵呵~~我感觉可能也是因为扩增效率的问题~~谢谢
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聪明才智要为意外做准备~~
9楼2012-06-18 12:27:09
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的将近700也做了，效果也很好
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10楼2012-06-18 12:44:09
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